即用型流式细胞分析试剂 | Thermo Fisher Scientific

最简单的流式细胞分析方法

Invitrogen Ready Flow试剂是即用型溶液，专为用于流式细胞分析的细胞染色而设计，具有如下特性：

无需计算
无需稀释
无需移液

Ready Flow试剂简化了最常用的流式细胞分析

使用方便的滴瓶，向每毫升浓度为1 x 10⁶ 细胞/mL的单细胞混悬液中加入 2 滴试剂，然后进行孵育和分析。 Ready Flow试剂能够满足您最常见的流式细胞分析需求，包括死细胞鉴定和细胞周期（图 1）分析。为流式细胞术分析制备样品很容易。

图1：使用 FxCycle Violet Ready Flow试剂和 InvitrogenClick-iT EdU Alexa Fluor 647 流式细胞分析试剂盒进行细胞周期分析。 使用 10 µM EdU 刺激Jurkat细胞（一种人T细胞白血病细胞株） 2小时，然后使用 Alexa Fluor 647叠氮化物检测。随后，加入2滴FxCycle Violet Ready Flow试剂并在 25°C 孵育30分钟，完成细胞染色。利用Invitrogen Attune NxT流式细胞仪的405激光器和440/50 nm发射滤光器采集数据。群体分析显示如下分布：凋亡 sub-G₁期细胞为3.4%；G₀/G₁期为49.1%；S 期为33.0%；G₂M 期为14.0%。

Ready Flow 试剂

	SYTOX Green Ready Flow 试剂	Ready Flow 碘化丙啶试剂	SYTOX AADvanced Ready Flow 试剂	TO-PRO 3 Ready Flow 试剂
读取	死细胞在使用试剂标记后发出强荧光，易于与活细胞区分；无需计算，无需稀释，无需移液。
标记原理	细胞膜不完整，试剂能够进入细胞并与核酸结合。
靶标	核酸	核酸	核酸	dsDNA
荧光	与核酸结合后，荧光增强超过100倍	试剂本身无荧光；与核酸结合后，荧光增强 20-30倍	与核酸结合后，荧光增强超过500倍	试剂本身无荧光；与DNA结合后，荧光增强
储存	室温	室温	室温	室温
染色模式可固定？	否	否	否	否
可渗透活细胞？	否	否	否	否
试剂的 Ex/Em (nm)	504⁄523	535/617	546⁄647	642/661
推荐激发光源	488 nm（蓝色）	488 nm（蓝色） 532 nm（绿色） 561 nm（黄色）	488 nm（蓝色） 532 nm（绿色） 561 nm（黄色）	633 nm 或 635 nm（红色）
推荐带通滤波器	530/30	574/26 585/16 590/40 620/15 695/40	695/40	670/10
货号	R37168	R37169	R37173	R37170

	Hoechst 33342 Ready Flow 试剂	FxCycle Violet Ready Flow试剂	Vybrant DyeCycle Violet Ready Flow 试剂
读取	试剂与活细胞DNA结合产生荧光信号，可实现细胞周期分析；无需计算，无需稀释，无需移液。	试剂与固定细胞DNA结合产生荧光信号，可实现细胞周期分析；无需计算，无需稀释，无需移液。	试剂与活细胞DNA结合产生荧光信号，可实现细胞周期和DNA含量分析；无需计算，无需稀释，无需移液。
靶标	dsDNA	dsDNA	dsDNA
标记原理	该染色剂是一种DNA小沟结合剂，优先与 DNA 的腺嘌呤-胸腺嘧啶区域结合。		染色剂具有细胞渗透性，与双链DNA结合后发出的荧光信号与DNA质量成比例。
荧光	试剂本身无荧光。试剂与靶标结合后，荧光大大增强，但对染料结构无修改。
储存	室温	室温	室温
支持活细胞检测？	是	否	是
染色模式可固定？	否	否	否
支持固定细胞检测？	是	是	否
试剂的 Ex/Em (nm)	361/497	358/461	369/437
推荐激发光源	UV (350 nm) 或 405 nm	UV (350 nm) 或 405 nm	UV (350 nm) 或 405 nm
推荐带通滤波器	440/50	450/50	440/40
货号	R37165	R37166	R37172

	Annexin V Pacific Blue Ready Flow试剂	Annexin V Alexa Fluor 488 Ready Flow试剂	Annexin V Alexa Fluor 647 Ready Flow试剂	Annexin V APC Ready Flow 试剂	CellEvent Caspase-3/7 Green Ready Flow试剂盒
读取	试剂与凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸结合，产生荧光信号；无需计算，无需稀释，无需移液。				荧光底物可检测凋亡细胞的活化型 caspases 3和 7；无需计算，无需稀释，无需移液。试剂盒包含的 SYTOX AADvanced 死细胞染色剂用于检测死细胞。
标记原理	当存在Ca2+ 时，annexin V 偶联物与凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸（PS）以高亲和力结合。 annexin V 偶联物还能通过死细胞的破损细胞膜并与细胞内部的PS结合。建议使用一种非细胞通透性死细胞染色剂与annexin V偶联物共同染色，以便区分死细胞和凋亡细胞。				CellEvent试剂是一种与核酸结合染料相连的四个氨基酸多肽 (DEVD)。细胞凋亡期间，caspase-3 和 caspase-7 蛋白激活，可切割 DEVD 多肽之中的编码 caspase 3/7 识别序列。
靶标	与凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合				Caspase 3/7蛋白，死细胞
荧光	否	否	否	否	是；识别序列被切割后，试剂与DNA结合，使凋亡细胞发出明亮的信号
储存	室温	室温	室温	室温	室温
染色模式可固定	否	否	否	否	否
可渗透活细胞	否	否	否	否	是
试剂的 Ex/Em (nm)	410/455	495/519	650/665	650/660	CellEvent Caspase-3/7: ~511/533; SYTOX AADvanced: 546/647
推荐激发光源	405 nm	488 nm	633 或 635 nm	633 或 635 nm	CellEvent Caspase-3/7: 488 nm; SYTOX AADvanced: 488 nm（蓝色），532 nm（绿色）或 561 nm（黄色）
推荐带通滤波器	450/50	530/30	661/8	661/8	CellEvent Caspase-3/7: 530/30; SYTOX AADvanced: 695/40
货号	R37177	R37174	R37175	R37176	R37167

细胞活性

	SYTOX Green Ready Flow 试剂	Ready Flow 碘化丙啶试剂	SYTOX AADvanced Ready Flow 试剂	TO-PRO 3 Ready Flow 试剂
读取	死细胞在使用试剂标记后发出强荧光，易于与活细胞区分；无需计算，无需稀释，无需移液。
标记原理	细胞膜不完整，试剂能够进入细胞并与核酸结合。
靶标	核酸	核酸	核酸	dsDNA
荧光	与核酸结合后，荧光增强超过100倍	试剂本身无荧光；与核酸结合后，荧光增强 20-30倍	与核酸结合后，荧光增强超过500倍	试剂本身无荧光；与DNA结合后，荧光增强
储存	室温	室温	室温	室温
染色模式可固定？	否	否	否	否
可渗透活细胞？	否	否	否	否
试剂的 Ex/Em (nm)	504⁄523	535/617	546⁄647	642/661
推荐激发光源	488 nm（蓝色）	488 nm（蓝色） 532 nm（绿色） 561 nm（黄色）	488 nm（蓝色） 532 nm（绿色） 561 nm（黄色）	633 nm 或 635 nm（红色）
推荐带通滤波器	530/30	574/26 585/16 590/40 620/15 695/40	695/40	670/10
货号	R37168	R37169	R37173	R37170

细胞周期

	Hoechst 33342 Ready Flow 试剂	FxCycle Violet Ready Flow试剂	Vybrant DyeCycle Violet Ready Flow 试剂
读取	试剂与活细胞DNA结合产生荧光信号，可实现细胞周期分析；无需计算，无需稀释，无需移液。	试剂与固定细胞DNA结合产生荧光信号，可实现细胞周期分析；无需计算，无需稀释，无需移液。	试剂与活细胞DNA结合产生荧光信号，可实现细胞周期和DNA含量分析；无需计算，无需稀释，无需移液。
靶标	dsDNA	dsDNA	dsDNA
标记原理	该染色剂是一种DNA小沟结合剂，优先与 DNA 的腺嘌呤-胸腺嘧啶区域结合。		染色剂具有细胞渗透性，与双链DNA结合后发出的荧光信号与DNA质量成比例。
荧光	试剂本身无荧光。试剂与靶标结合后，荧光大大增强，但对染料结构无修改。
储存	室温	室温	室温
支持活细胞检测？	是	否	是
染色模式可固定？	否	否	否
支持固定细胞检测？	是	是	否
试剂的 Ex/Em (nm)	361/497	358/461	369/437
推荐激发光源	UV (350 nm) 或 405 nm	UV (350 nm) 或 405 nm	UV (350 nm) 或 405 nm
推荐带通滤波器	440/50	450/50	440/40
货号	R37165	R37166	R37172

细胞凋亡

	Annexin V Pacific Blue Ready Flow试剂	Annexin V Alexa Fluor 488 Ready Flow试剂	Annexin V Alexa Fluor 647 Ready Flow试剂	Annexin V APC Ready Flow 试剂	CellEvent Caspase-3/7 Green Ready Flow试剂盒
读取	试剂与凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸结合，产生荧光信号；无需计算，无需稀释，无需移液。				荧光底物可检测凋亡细胞的活化型 caspases 3和 7；无需计算，无需稀释，无需移液。试剂盒包含的 SYTOX AADvanced 死细胞染色剂用于检测死细胞。
标记原理	当存在Ca2+ 时，annexin V 偶联物与凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸（PS）以高亲和力结合。 annexin V 偶联物还能通过死细胞的破损细胞膜并与细胞内部的PS结合。建议使用一种非细胞通透性死细胞染色剂与annexin V偶联物共同染色，以便区分死细胞和凋亡细胞。				CellEvent试剂是一种与核酸结合染料相连的四个氨基酸多肽 (DEVD)。细胞凋亡期间，caspase-3 和 caspase-7 蛋白激活，可切割 DEVD 多肽之中的编码 caspase 3/7 识别序列。
靶标	与凋亡细胞表面的磷脂酰丝氨酸结合				Caspase 3/7蛋白，死细胞
荧光	否	否	否	否	是；识别序列被切割后，试剂与DNA结合，使凋亡细胞发出明亮的信号
储存	室温	室温	室温	室温	室温
染色模式可固定	否	否	否	否	否
可渗透活细胞	否	否	否	否	是
试剂的 Ex/Em (nm)	410/455	495/519	650/665	650/660	CellEvent Caspase-3/7: ~511/533; SYTOX AADvanced: 546/647
推荐激发光源	405 nm	488 nm	633 或 635 nm	633 或 635 nm	CellEvent Caspase-3/7: 488 nm; SYTOX AADvanced: 488 nm（蓝色），532 nm（绿色）或 561 nm（黄色）
推荐带通滤波器	450/50	530/30	661/8	661/8	CellEvent Caspase-3/7: 530/30; SYTOX AADvanced: 695/40
货号	R37177	R37174	R37175	R37176	R37167

资源

流式细胞分析实验方案

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