Epitope-tagged protein purification

我们提供多种载体，供使用固定化抗标签抗体对 DYKDDDDK (FLAG)、c-Myc 和 HA 标签蛋白进行高效纯化。我们的产品组合旨在满足小规模（筛选）到中试规模的需求。

  • 特异性——基于高度特异性单克隆抗体的配体可实现高得率、高纯度的免疫沉淀，适合小规模到中试规模蛋白纯化。
  • 低非特异性结合——稳定的微珠和靶标特异性抗体可尽可能减少脱靶结合
  • 可扩展——提供更大的包装规格，实现更大的纯化规模和更经济的价格
  • 通用——提供多种树脂形式，可用于离心或重力柱以及 FPLC 纯化柱
  • 支持自动化——推荐使用磁性琼脂糖或磁珠进行高通量应用
  • 便利——可单独提供用于洗脱和检测标签融合蛋白的试剂

选择一种表位标签免疫亲和纯化产品

 Pierce 抗 DYKD4K (FLAG) 磁性琼脂糖Pierce 抗 DYKD4K (FLAG) 亲和树脂 UltraLinkPierce 抗 c-Myc 磁珠Pierce 抗 c-Myc 琼脂糖 (Superflow 6)Pierce 抗 HA 磁珠Pierce 抗 HA 琼脂糖
微珠或树脂尺寸10 - 40 uM50 - 80 um1 uM45-165 μm1 uM45-165 μm
结合容量≥3 mg/mL≥ 3 mg/mL≥ 100 μg/mL60-150 nmol/mL ≥ 100 μg/mL102 - 144 nmol/mL 
最大线性流速 (cm/hr)不适用3,000不适用1,200不适用700
载体磁石嵌入型 6% 微珠状琼脂糖耐用型微珠状聚丙烯酰胺载体磁石包被聚合物高度交联 6% 微珠状琼脂糖磁石包被聚合物4% 微珠状琼脂糖
推荐的应用规模高通量批量批量、中试高通量筛选批量、中试高通量筛选批量
可选产品形式松散微珠松散树脂松散微珠松散树脂松散微珠松散树脂
推荐的应用规模筛选 批量、中试批量、中试筛选批量、中试批量、中试
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图1.使用 Pierce 抗 DYKDDDDK 载体和其他供应商的载体获得的 DYKDDDDK 标签 SUMO 蛋白纯化结果的比较。C 端和 N 端 DYKDDDDK 标签 SUMO 蛋白在大肠杆菌中表达，并使用两种 Pierce 抗 DYKDDDDK 和其他供应商的载体进行纯化。标签蛋白用 3x DYKDDDDK 多肽进行竞争性洗脱，采用 SDS-PAGE（A、C）和密度测定法（B、D）通过 Invitrogen iBright 成像系统进行分析。图中显示了使用 Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖（A、B）和 Pierce 抗 DYKDDDDK 亲和树脂（C、D）及其他供应商的产品获得的结果。与其他供应商相比，起始裂解液和洗脱组分的比较表明，Pierce 载体可有效捕获和洗脱 DYKDDDDK 标签蛋白，且背景极低。

图2.Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖与另一供应商产品的蛋白纯化结果的比较。采用 Thermo Scientific 一步法人高得率 Maxi IVT 试剂盒表达 C 端 DYKDDDDK 标记绿色海肾荧光素酶蛋白，并通过 KingFisher Flex 纯化系统使用 Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖或 Sigma-Aldrich 抗 FLAG™ M2 磁珠对其进行免疫沉淀。使用 Pierce 3x DYKDDDDK 肽对标记蛋白进行竞争性洗脱，然后，使用蛋白免疫印迹 (A)、银染色 (C) 和 Pierce 海肾荧光素酶辉光检测试剂盒 (B) 分析。比较起始裂解物 (L)、洗脱物 (E) 和微珠煮沸样本 (BB) 的结果显示有效捕获和洗脱了 DYKDDDDK 标记蛋白且无背景噪声。蛋白和活性水平的相关性表明，在纯化和竞争性肽洗脱后，绿色海肾荧光素酶保持高活性水平。

Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖与其他供应商产品的蛋白纯化结果的比较

图3.动态结合容量与驻留时间。将 Pierce 抗 DYKDDDDK 亲和树脂和 Sigma Anti-FLAG™ M2 亲和凝胶填装到 1 mL 色谱柱 (0.5 cmD x 5 cmL) 中，在各种驻留时间下（150 cm/hr、60 cm/hr 和 30 cm/hr）与纯化 DYKDDDDK-TurboGFP-His (1 mg/mL) 一起添加到含 100 mM 磷酸盐、150 mM NaCl 的 pH 7.2 溶液 (PBS) 中，直至达到 10% 流穿（按 A280 测量值计算）。

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图4.使用 Thermo Scientific Pierce 抗 HA 磁珠获得更佳的免疫沉淀结果。使用包含96深孔板的 KingFisher Flex 仪器、25 μL Pierce 抗 HA 磁珠、抗 HA 标签磁珠 (MBL International Corp.) 和 SPHERO™ 兔抗 HA 磁珠 (Spherotech Inc.) 对两份相同 50 μg 大肠杆菌裂解液中的 GST-PI3K-SH2-HA 进行免疫沉淀。捕获的蛋白用 0.1 M 甘氨酸（pH 值2.0）进行洗脱，然后通过 SDS-PAGE 分离，并通过蛋白质免疫印迹法对 HA 标签蛋白进行分析。

使用 Thermo Scientific Pierce 抗 c-Myc 磁珠获得更佳的免疫沉淀结果

图5.使用 Thermo Scientific Pierce 抗 c-Myc 磁珠获得更佳的免疫沉淀结果。绿色海肾荧光素酶 c-Myc 融合蛋白在 293T 细胞中表达。对于 IP，在室温下将两份相同的等份细胞裂解液与来自每个制造商的抗 c-Myc 磁珠一起孵育1小时。在所有条件下，使用低 pH 缓冲液以完全相同的方式洗脱 IP 产品。通过 12% SDS-PAGE 分离洗脱组分（各 25 µL），将其转印到 PVDF 膜上，并通过抗 c-Myc 抗体（货号 MA1-980）、山羊抗小鼠二抗和化学发光底物（货号34080）进行检测。

抗 DYKD4K 结果

图1.使用 Pierce 抗 DYKDDDDK 载体和其他供应商的载体获得的 DYKDDDDK 标签 SUMO 蛋白纯化结果的比较。C 端和 N 端 DYKDDDDK 标签 SUMO 蛋白在大肠杆菌中表达，并使用两种 Pierce 抗 DYKDDDDK 和其他供应商的载体进行纯化。标签蛋白用 3x DYKDDDDK 多肽进行竞争性洗脱，采用 SDS-PAGE（A、C）和密度测定法（B、D）通过 Invitrogen iBright 成像系统进行分析。图中显示了使用 Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖（A、B）和 Pierce 抗 DYKDDDDK 亲和树脂（C、D）及其他供应商的产品获得的结果。与其他供应商相比，起始裂解液和洗脱组分的比较表明，Pierce 载体可有效捕获和洗脱 DYKDDDDK 标签蛋白，且背景极低。

图2.Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖与另一供应商产品的蛋白纯化结果的比较。采用 Thermo Scientific 一步法人高得率 Maxi IVT 试剂盒表达 C 端 DYKDDDDK 标记绿色海肾荧光素酶蛋白，并通过 KingFisher Flex 纯化系统使用 Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖或 Sigma-Aldrich 抗 FLAG™ M2 磁珠对其进行免疫沉淀。使用 Pierce 3x DYKDDDDK 肽对标记蛋白进行竞争性洗脱，然后，使用蛋白免疫印迹 (A)、银染色 (C) 和 Pierce 海肾荧光素酶辉光检测试剂盒 (B) 分析。比较起始裂解物 (L)、洗脱物 (E) 和微珠煮沸样本 (BB) 的结果显示有效捕获和洗脱了 DYKDDDDK 标记蛋白且无背景噪声。蛋白和活性水平的相关性表明，在纯化和竞争性肽洗脱后，绿色海肾荧光素酶保持高活性水平。

Pierce 抗 DYKDDDDK 磁性琼脂糖与其他供应商产品的蛋白纯化结果的比较

图3.动态结合容量与驻留时间。将 Pierce 抗 DYKDDDDK 亲和树脂和 Sigma Anti-FLAG™ M2 亲和凝胶填装到 1 mL 色谱柱 (0.5 cmD x 5 cmL) 中，在各种驻留时间下（150 cm/hr、60 cm/hr 和 30 cm/hr）与纯化 DYKDDDDK-TurboGFP-His (1 mg/mL) 一起添加到含 100 mM 磷酸盐、150 mM NaCl 的 pH 7.2 溶液 (PBS) 中，直至达到 10% 流穿（按 A280 测量值计算）。

抗 HA 结果
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图4.使用 Thermo Scientific Pierce 抗 HA 磁珠获得更佳的免疫沉淀结果。使用包含96深孔板的 KingFisher Flex 仪器、25 μL Pierce 抗 HA 磁珠、抗 HA 标签磁珠 (MBL International Corp.) 和 SPHERO™ 兔抗 HA 磁珠 (Spherotech Inc.) 对两份相同 50 μg 大肠杆菌裂解液中的 GST-PI3K-SH2-HA 进行免疫沉淀。捕获的蛋白用 0.1 M 甘氨酸（pH 值2.0）进行洗脱，然后通过 SDS-PAGE 分离，并通过蛋白质免疫印迹法对 HA 标签蛋白进行分析。

抗 c-Myc 结果
使用 Thermo Scientific Pierce 抗 c-Myc 磁珠获得更佳的免疫沉淀结果

图5.使用 Thermo Scientific Pierce 抗 c-Myc 磁珠获得更佳的免疫沉淀结果。绿色海肾荧光素酶 c-Myc 融合蛋白在 293T 细胞中表达。对于 IP，在室温下将两份相同的等份细胞裂解液与来自每个制造商的抗 c-Myc 磁珠一起孵育1小时。在所有条件下，使用低 pH 缓冲液以完全相同的方式洗脱 IP 产品。通过 12% SDS-PAGE 分离洗脱组分（各 25 µL），将其转印到 PVDF 膜上，并通过抗 c-Myc 抗体（货号 MA1-980）、山羊抗小鼠二抗和化学发光底物（货号34080）进行检测。

仅供科研使用，不可用于诊断目的。