在血细胞计数板中进行细胞计数

常见细胞类型的生长因子类型

除了下述材料外，血球计数板还可从Fisher Scientific获得。

以下流程为使用血球计数板手动计数细胞的一般指导。贴壁细胞的消化和悬浮细胞的收集用于计数和分析需要额外的步骤。

参见贴壁细胞培养操作规程
参见悬浮细胞培养操作规程

如果您希望测量活细胞的浓度，可以加入台盼蓝染色。

参见台盼蓝排除法操作规程

1. 用酒精清洁计数室和盖玻片。将盖玻片擦干并固定到位。
2. 收集细胞，并轻柔但彻底地重悬细胞沉淀（如有需要）。使用微量移液器，向血球计数板中加入10微升细胞溶液。不要加得过满。
3. 将计数室固定在倒置显微镜下，使用10倍物镜。用相差显微镜来区分细胞。
4. 为了计算细胞数量，在大而中央的有格方块（1平方毫米）中以之字形方式沿每一行计数活细胞数量。下图中已圈出该有格方块。将计数结果乘以10的4次方，以估算每毫升的细胞数量（样品中的细胞浓度）。准备重复样品并取平均值，以获得细胞浓度。

10,000，即10的4次方，是一个校正因子，用于将Neubauer计数板一个网格中计数到的活细胞数转换为每毫升（mL）细胞数。

如上所述，Neubauer 计数板的体积为 0.1 mm³。0.¹ mm³ 的体积等于 1x10⁻⁴ ^mL，即 1/10,⁰⁰⁰ mL。如果我们想要计算一个 Neubauer 计数板的细胞浓度（细胞数/1 mL），需要将所计数的细胞数乘以 10,000，以将一个计数格的体积换算为 1 mL。

因此，我们需要乘以 10,000（10⁴），以获得每毫升细胞的浓度。

使用血球计数板需要研究人员手动计算，以确定样品中的细胞浓度。在基本的血球计数板计算中，如上述实验步骤所述，研究人员通过将中央计数格中的细胞数乘以 10⁴ 来计算细胞浓度。

然而，如果你想要计算样品中活细胞的密度，可以使用以下公式：C = N x D x 10³。
C ⁼ 活细胞浓度（个/mL）
N = 在 10 个小格（1.0 mm³）中计数的活细胞数
D = 稀释倍数
10³ = 修正系数

你可能还想知道在总细胞浓度中有多少细胞是活细胞。可以使用以下公式计算：V = N/T x 100%。
V = 活细胞百分比
N = 在 10 个小格（1 mm³）中计数的活细胞数
T =在 10 个小格（1 mm³）中计数的总细胞数

血球计数板最初是为计数血细胞而开发的，后来也被用于计数各种类型和物种的细胞。虽然在血球计数板上计数细胞是传统的细胞计数方法，但它并不一定是最高效或最准确的。许多血球计数板的使用者选择这种细胞计数方法，是因为它在许多现有的实验方案和研究中被广泛引用。然而，手动计数细胞通常耗时且容易出现人为错误。自动细胞计数仪正在成为细胞计数方案的新标准。比较一下使用血球计数板与自动细胞计数仪进行细胞计数的区别。

查看细胞计数信息库

1. Absher, Marlene (1973) 第一章 – 血球计数板计数。组织培养。Academic Press. 第395–397页。
2. Hoffman, Tracy L. (2006) 细胞计数。细胞生物学（第三版）。Academic Press. 第21–24页。
3. Camacho-Fernández, C., Hervás, D., Rivas-Sendra, A. 等（2018）六种不同细胞密度计算方法的比较。Plant Methods14, 30。 
4. Fuentes,Maria. (2024) 血球计数板——使用血球计数板进行细胞计数 
5. 血球计数板图片https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Hemocytometer.jpg 。许可协议：https://creativecommons.org/licenses/by-sa/2.0/ 。该图片未经过任何修改。