冷冻细胞在复苏过程中会受到一定程度的应激，因此规范操作并快速完成复苏步骤对于提高细胞存活率至关重要。 与其他细胞培养操作一样，我们建议您严格按照细胞及相关试剂随附的说明进行冻存和复苏，以获得最佳实验结果。
以下操作规程介绍了细胞复苏的一般方法。 有关具体操作步骤，请务必参考相应细胞产品随附的产品说明书。复苏过程中，应始终遵循无菌操作规范 并在层流洁净工作台内进行操作. 同时，请佩戴适当的个人防护装备（PPE），包括口罩或护目镜。
注意：复苏储存在液氮液相中的冻存管时请务必谨慎操作，因为此类冻存管存在爆裂风险。
部分冻存液含有二甲基亚砜（DMSO），该物质可促进有机分子进入组织。处理含有 DMSO 的试剂时，应根据其潜在危害采取适当的防护措施，并使用相应的设备进行操作。
- 从液氮储存容器中取出装有冷冻细胞的冻存管，并立即将其置于 37°C 水浴中。
- 轻轻晃动冻存管，使细胞在 37°C 水浴中快速复苏（<1 分钟），直至管内仅剩少量冰晶。
- 将冻存管转移至层流洁净工作台内。开启冻存管前，先用 70% 乙醇擦拭管外表面进行消毒。
- 将复苏后的细胞缓慢逐滴加入装有适量预热完全培养基的离心管中。所用培养基应适用于相应的细胞系。
- 以约 200 × g 离心细胞悬液 5–10 分钟。实际离心力和离心时间应根据细胞类型进行调整。
- 离心后，检查上清液是否澄清，并确认细胞沉淀是否完整可见。在无菌条件下，小心倾倒上清液，避免扰动细胞沉淀。
- 轻轻重悬细胞于完全培养基中，并将其转移至合适的培养容器，在推荐的培养条件下进行培养。为提高细胞复苏后的恢复效果，建议以较高接种密度接种复苏后的细胞。
注意：培养瓶的规格应根据冻存管中的细胞数量选择；培养条件则应根据细胞类型和培养基类型进行调整。
解冻细胞的目的是在尽量减少损伤的情况下将细胞从冷冻状态复苏。采用正确的方法并排查常见问题（如恢复缓慢或污染）对于维持细胞活力至关重要。
| 问题 | 建议 |
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细胞储存不当
| - 使用新的细胞库存，并将其储存在液氮中。在复苏前，细胞应始终储存在液氮中。
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自制冻存样本不可用
| - 按供应商推荐的细胞密度进行冻存。
- 使用低传代细胞建立自己的细胞冻存库。
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- 严格按照供应商推荐的操作规程进行细胞冻存。
- 重新获取新的细胞冻存管。
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细胞复苏操作不当
| - 严格按照供应商推荐的操作规程进行细胞复苏。请注意，本页提供的细胞复苏流程仅为一般性操作指南。
- 确保快速复苏冷冻细胞，并在接种前使用预热的培养基缓慢稀释细胞悬液。
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复苏培养基不正确
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细胞密度过低
| - 按照供应商推荐的方法，以较高的接种密度接种复苏后的细胞，以提高细胞复苏后的恢复效果。
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细胞处理不够轻柔
| - 细胞冻存和复苏过程都会对大多数细胞造成应激。操作过程中，应避免使用涡旋振荡器混匀，不要拍打培养瓶使细胞脱落（昆虫细胞培养除外），也不要以过高的离心力离心细胞。
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冻存液中的甘油储存时受到光照（如适用）
| - 甘油暴露于光照下会转化生成丙烯醛，而丙烯醛对细胞具有毒性。请重新获取新的试剂。
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