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NuPAGE Bis-Tris凝胶在Invitrogen半干转仪中的转印效率不如在XCell II转印模块中高。如果您决定使用Invitrogen半干转仪进行NuPAGE -Tris凝胶转印,则应使用下述实验方案以确保蛋白质的有效转印。 1.如下所述,使用20X NuPAGE转膜缓冲液制备100 mL的2X NuPAGE转膜缓冲液: NuPAGE转膜缓冲液(20X)10.0 mL NuPAGE抗氧化剂(用于还原型样品)0.1 mL 甲醇10.0 mL 去离子水79.9 mL 总体积100 mL 如果您转印的是大分子蛋白质,请参见下方备注。 2.在转膜缓冲液中浸泡滤纸和印迹膜。如果您在使用Invitrogen预切膜/滤纸三明治,则应在凝胶或膜的外侧分别使用3张滤纸(每张滤纸厚0.4 mm)。如果您未使用Invitrogen预切膜/滤纸三明治,则使用2张厚滤纸。 3.将凝胶置于转膜缓冲液(中型凝胶使用100 mL,小型凝胶使用50 mL)中,放置在定轨摇床上平衡10分钟,从而去除转印液中的盐,以避免电导率和产热的增加。 4.如下所述,在阳极板上装配凝胶/膜/滤纸三明治: 滤纸 滤纸 滤纸 滤纸 膜 凝胶 凝胶 凝胶 5.在20 V恒定电压条件下转印30-60分钟。 备注:转印大分子量蛋白质(>100 kDa)时,可在装配三明治前,将凝胶置于含0.02-0.04% SDS 的2X NuPAGE转膜缓冲液(无甲醇)中预平衡10分钟。
以下是可能原因和解决方案: -使用了浓度过高或错误的缓冲液。应检查缓冲液配方;必要时,稀释或重新配制。 -电压、电流或功率设置过高。将电源条件降低至推荐的电泳条件。
请务必查看电源、设备或凝胶是否存在问题。通常,切断电源或开盖查看是否有连接错误可帮助解决问题。同时,应检查凝胶盒底部的胶带是否已去除以及缓冲液核心装置是否损坏。此外,应确保电泳槽中的缓冲液足以浸没凝胶的上样孔。
我们的新型Bolt Bis-Tris Plus小型凝胶(货号NWxxxxxBOX)以及Invitrogen小型凝胶和NuPAGE小型凝胶,可使用小型凝胶电泳槽进行电泳。请注意,传统Bolt Bis-Tris Plus小型凝胶(货号BGxxxxxBOX,2014年12月31日起停产)只能使用Bolt小型凝胶电泳槽(2014年12月31日起停产,库存售尽后将停止供应)。
我们的新型Bolt Bis-Tris Plus小型凝胶(货号NWxxxxxBOX)以及Invitrogen小型凝胶和NuPAGE小型凝胶均可使用XCell SureLock Mini-Cell进行电泳。