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NuPAGE™ 12%,Bis-Tris,1.0 mm,小型蛋白凝胶
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NuPAGE™ 12%,Bis-Tris,1.0 mm,小型蛋白凝胶

Invitrogen NuPAGE Bis-Tris 预制胶是用于各种分子量蛋白在变性条件下进行高效分离的预制聚丙烯酰胺凝胶。与传统 Tris- 甘氨酸预制胶不同,NuPAGE Bis-Tris 预制胶具有中性 pH了解更多信息
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货号数量
NP0342PK212孔2 块凝胶/盒
NP0341BOX10孔10 块凝胶/盒
NP0341PK210孔2 块凝胶/盒
NP0342BOX12孔10 块凝胶/盒
NP0343BOX15孔10 块凝胶/盒
NP0344BOX1孔10 块凝胶/盒
NP0346BOX2D 孔10 块凝胶/盒
NP0349BOX17孔10 块凝胶/盒
货号 NP0342PK2
价格(CNY)
142.00
Each
孔:
12孔
数量:
2 块凝胶/盒
价格(CNY)
142.00
Each
Invitrogen NuPAGE Bis-Tris 预制胶是用于各种分子量蛋白在变性条件下进行高效分离的预制聚丙烯酰胺凝胶。与传统 Tris- 甘氨酸预制胶不同,NuPAGE Bis-Tris 预制胶具有中性 pH 环境,可尽量减少蛋白质修饰。使用 NuPAGE Bis-Tris 预制胶制备蛋白质以用于测序、质谱分析、以及任何其他蛋白质完整性至关重要的技术。同时,也可使用 NuPAGE 预制胶以在日常使用中获得理想的结果。

NuPAGE Bis-Tris 预制胶的特点包括:
•更好的蛋白完整性—优化的样品制备过程可保留您的蛋白质
•广泛的分子量分离范围—选择正确的凝胶和电泳缓冲液有助于实现蛋白质的最佳分离
•更短的电泳时间—在短短 35 分钟内即可分离蛋白质
•更长的有效期— NuPAGE Bis-Tris 预制胶可在室温下储存至少 12 月

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选择适用于您蛋白质分离的 NuPAGE Bis-Tris 预制胶
选择合适的凝胶和电泳缓冲液,有助于实现蛋白的最佳分离。NuPAGE Bis-Tris 蛋白预制胶有 4 种聚丙烯酰胺浓度:8%、10%、12% 和 4–12% 梯度。凝胶有两种尺寸:小型 (8 cm x 8 cm) 或中型 (8.7 cm x 13.3 cm),厚度为 1.0 mm (小型和中型凝胶)或 1.5 mm (仅限小型凝胶规格)。NuPAGE Bis-Tris 预制胶还具有多种孔规格。

NuPAGE Bis-Tris 预制胶适用于变性凝胶电泳应用。要实现理想样品制备,请使用 NuPAGE LDS 上样缓冲液 NuPAGE 样品还原剂。在电泳缓冲液中使用 NuPAGE 抗氧化剂可在电泳期间保持蛋白质的还原状态,并达到最大的条带清晰度。凝胶可搭配 NuPAGE MES SDS 电泳缓冲液使用,以更高效地分离低分子量蛋白,或者搭配 NuPAGE MOPS SDS 电泳缓冲液使用,以分离中至高分子量蛋白。

我们还提供 NuPAGE tris-乙酸凝胶用于分离分子量更大的蛋白质。对于经典的基于 Laemmli 的 Tris- 甘氨酸电泳系统,我们提供了 Novex Tris- 甘氨酸预制胶

用于将蛋白质转印到膜上,我们建议使用 NuPAGE 转膜缓冲液。使用 Pierce Power Blotter 可实现快速半干式转印,或使用 iBlot2 凝胶转膜仪进行快速干式转印。或者,可以使用 XCell II Blot 模块迷你印迹模块.

相关链接
1D 蛋白电泳概述
NuPAGE Tris-Bis 与传统 Tris-甘氨酸凝胶的比较
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
规格
适用于(设备)XCell SureLock Mini-Cell 电泳槽操作指南
凝胶厚度1.0 mm
长度(公制)8 cm
分离模式分子量
数量2 块凝胶/盒
推荐应用变性
上样容量最多 20 µL
有效期12个月
运输条件室温
储存要求储存于 4–25°C。切勿冷冻。
宽度(公制)8 cm
凝胶百分比12%
凝胶尺寸小型
凝胶类型Bis-Tris 体系
产品线NuPAGE
分离范围3.5至80 kDa
分离类型变性
12孔
Unit SizeEach
内容与储存
一盒中包含 2 支凝胶。于4–25°C 下储存。切勿冷冻。有效期为 12 个月。

常见问题解答 (FAQ)

我将蛋白质置于Tris-甘氨酸凝胶上在非变性条件下进行电泳。蛋白质的pI高于Tris-甘氨酸转膜缓冲液的pH。你们建议如何对蛋白质进行转印?

•将Tris-甘氨酸转膜缓冲液的pH增加至9.2,可使pl低于9.2的所有蛋白质朝阳极方向迁移。
•使用Tris-甘氨酸转膜缓冲液,并在凝胶两侧各放一张膜。碱性高于转膜缓冲液pH的蛋白质,将被凝胶阴极侧的膜捕获。随后,可以用相同的方式处理两张膜。
•转印前,将凝胶置于含0.1% SDS的Tris-甘氨酸转膜缓冲液中孵育15分钟。少量的SDS会给予蛋白质足够的电荷,使蛋白质朝阳极端单向移动,并且在大部分情况下不会使蛋白质变性。然后,使用常规Tris-甘氨酸转膜缓冲液进行转印。

能否使用Invitrogen半干转仪对NuPAGE Bis-Tris凝胶进行转印?

NuPAGE Bis-Tris凝胶在Invitrogen半干转仪中的转印效率不如在XCell II转印模块中高。如果您决定使用Invitrogen半干转仪进行NuPAGE -Tris凝胶转印,则应使用下述实验方案以确保蛋白质的有效转印。

1.如下所述,使用20X NuPAGE转膜缓冲液制备100 mL的2X NuPAGE转膜缓冲液:
NuPAGE转膜缓冲液(20X)10.0 mL
NuPAGE抗氧化剂(用于还原型样品)0.1 mL
甲醇10.0 mL
去离子水79.9 mL
总体积100 mL
如果您转印的是大分子蛋白质,请参见下方备注。

2.在转膜缓冲液中浸泡滤纸和印迹膜。如果您在使用Invitrogen预切膜/滤纸三明治,则应在凝胶或膜的外侧分别使用3张滤纸(每张滤纸厚0.4 mm)。如果您未使用Invitrogen预切膜/滤纸三明治,则使用2张厚滤纸。

3.将凝胶置于转膜缓冲液(中型凝胶使用100 mL,小型凝胶使用50 mL)中,放置在定轨摇床上平衡10分钟,从而去除转印液中的盐,以避免电导率和产热的增加。

4.如下所述,在阳极板上装配凝胶/膜/滤纸三明治:
滤纸
滤纸
滤纸
滤纸

凝胶
凝胶
凝胶

5.在20 V恒定电压条件下转印30-60分钟。

备注:转印大分子量蛋白质(>100 kDa)时,可在装配三明治前,将凝胶置于含0.02-0.04% SDS 的2X NuPAGE转膜缓冲液(无甲醇)中预平衡10分钟。

免疫印迹检测后,我的膜上有很多点。哪里出错了?

以下是可能原因和解决方案:

膜的转印垫不干净或污染。使用转印垫前,用去污剂浸泡,然后用纯水彻底清洗。转印垫破损或变色后,则更换新的转印垫。
封闭不均匀。孵育皿必须足够大,使封闭液能够完全覆盖膜。每一步都需要摇动或搅动。

免疫印迹检测后,我得到了很多非特异性结合。你们有何建议?

以下是可能原因和解决方案:

- 膜被指纹或角蛋白污染:始终佩戴干净的手套并使用镊子来处理膜。处理膜时,仅触碰膜的边缘。
- 二抗浓度较高:按照推荐方法稀释二抗。如果背景仍然很高,但条带强度也很高,则应降低二抗的浓度。
- 一抗浓度较高:降低一抗浓度。
-一抗对蛋白标准品具有亲和力:向蛋白标准品生产商咨询蛋白标准品与一抗的同源性。
- SDS残留或转印后蛋白质与膜的结合较弱:遵循免疫检测前的膜准备说明。
- 封闭时间过短或洗膜时间过长:应确保每一步都达到指定时间。

免疫印迹检测后,我得到了非常高的背景。你们有何建议?

以下是可能原因和解决方案:

- 封闭不充分或发生非特异性结合:建议尝试使用我们的WesternBreeze封闭剂/稀释液(货号WB7050)。
- 膜污染:仅使用干净的新膜。始终佩戴干净的手套并使用镊子来处理膜。
- PVDF膜本身具有较高的背景:改为使用硝化纤维素膜。
- 硝化纤维素膜未完全湿润:遵循预润湿膜的说明。
- 印迹膜显色过度:遵循推荐的显色时间,当达到可接受的信噪比时,从底物中取出印迹膜。
- 洗膜不充分:遵循推荐的洗膜次数。在一些情况下,可能有必要增加洗膜次数和时间。
- 二抗浓度较高:通过点印迹法确定最佳抗体浓度,必要时可稀释抗体。
- 一抗浓度较高:通过点印迹法确定最佳抗体浓度,必要时可稀释抗体。