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Invitrogen PureLink RNA 小提试剂盒可以通过柱式纯化法从多种细胞和组织类型中快速纯化总 RNA。兼容的细胞和组织类型包括哺乳动物细胞,植物细胞,酵母细胞,细菌和血液。
使用 PureLink RNA 小量提取试剂盒从组织培养细胞中纯化的 RNA 随即便可进行 RT-PCR 及后续使用金标准 Applied Biosystems TaqMan 基因表达检测进行的 qPCR 下游分析。使用 PureLink RNA 小量提取试剂盒分离的 RNA 进行基因表达分析 qPCR 的流程示例 图 1。
图1.PureLink RNA 小量提取试剂盒至 qPCR 的流程示例。该流程始于使用 PureLink RNA 小量提取试剂盒从组织培养物中分离 RNA。样本中提取获得的总 RNA 随后可用于使用ProFlex PCR 系统进行的 RT-PCR。使用 TaqMan 检测来测量样本之间 RNA 的相对量, 再使用QuantStudio 7 Pro 实时 PCR 系统进行 qPCR。
根据细胞或样本类型及起始量,PureLink RNA 小量提取试剂盒的平均提取得率为 1.8–350 µg 每个样本(表 1)。查看表 2中与 PureLink RNA 小量提取试剂盒兼容的细胞/样本类型列表。
| 样本类型 | 样本 | 起始量 | 平均得率 (μg) |
|---|---|---|---|
| 动物细胞 | HeLa 细胞 | 1 x 106 个细胞 | 15-20 |
| 293细胞 | 1 x 106 个细胞 | 20-25 | |
动物组织 | 大鼠肝脏 | 10 mg 100 mg | 60 300 |
| 大鼠大脑 | 10 mg 100 mg | 6 90 | |
| 大鼠脾脏 | 10 mg 100 mg | 58 320 | |
| 小牛胸腺 | 10 mg 100 mg | 58 350 | |
| 植物组织 | 拟南芥属 | 100 mg | 26 |
| 小麦 | 100 mg | 31 | |
| 玉米 | 100 mg | 36 | |
| 大米 | 100 mg | 37 | |
| 紫花苜蓿 | 100 mg | 32 | |
| 大豆 | 100 mg | 38 | |
| 甜菜 | 100 mg | 31 | |
| 200 mg | 65 | ||
| 酵母菌细胞 | 酿酒酵母 | 1 x 107 | 1.8 |
| 5 x 108 | 125 |
| 来源 | 用量 |
|---|---|
| 动物和植物细胞 | 至多5 x 107个细胞 |
| 动物组织 | 至多 200 mg |
| 细菌细胞 | 至多109个细胞 |
| 植物组织 | 至多 250 mg |
| 全血 | 至多 0.2 mL |
| 酵母菌细胞 | 至多5 x 108个细胞 |
柱式纯化试剂盒适用于总 RNA、mRNA、miRNA、小 RNA、病毒 RNA 和序列特异性 RNA 的提取。使用 PureLink RNA 小量提取试剂盒分离的总 RNA 可用于多种需要高品质总 RNA 的下游应用(图 2)。此类下游应用包括:
图2.高品质 RNA的外观。从 1 x 106 HeLa 细胞中提取 RNA,使用了 TRIzol 试剂、ChargeSwitch 总 RNA 细胞试剂盒、PureLink RNA 小量提取试剂盒以及 TRIzol Plus 纯化系统。通过分光光度计和 Agilent 生物分析仪测定 (A)A260/A280 和 A260/A230 和(B)RNA 完整性指数(RIN)。
如果需要去除残留 DNA, PureLink RNA 小量提取试剂盒提供柱上处理,以节省时间和保留珍贵的 RNA 样本,或使用 PureLink DNase 套装进行分离后 DNase 处理。
PureLink RNA快速提取技术结合了无毒裂解与硅胶膜纯化柱式RNA 纯化的速度、纯度和易用性。安全且简易的 RNA 纯化过程可以在 20 分钟内完成,可以从小到中等规模的起始物料中提取获得高品质的总 RNA,且无基因组 DNA 污染。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。
