快速、准确的蛋白质定量

Qubit 蛋白质检测试剂盒旨在简化并提供准确的蛋白质定量。Qubit 蛋白质检测仅需 10-15 分钟的室温培养,无需长时间培养或暴露于高温下。

 

这两种试剂盒拥有重叠的浓度范围,可在 12.5μg/mL 到 20 mg/mL 的初始样品浓度内保持准确,且结果对不同的蛋白质来说变异较小。这些检测可很好地兼容还原性试剂(DTT、β-巯基乙醇)、盐、游离核苷酸、氨基酸、 溶剂、 DNA 以及洗涤剂(Qubit 蛋白质 BR 检测中)等常见污染物。其他污染物可能需要略微改动检测程序。

 

注意:虽然 Qubit 蛋白质检测可在 Qubit 4 和 Flex 荧光仪上运行,但 Qubit 蛋白质 BR 检测试剂盒仅可在 Qubit 4 上运行。

蛋白质定量检测概述

特点

Qubit 蛋白质 BR 检测

Qubit 蛋白质检测

适用于

各种蛋白质浓度和类型

测试稀释样本,<100 μg/mL

兼容平台

Qubit 4 荧光仪

Qubit Flex、Qubit 4 荧光仪 *

特点

使用 2 点标准曲线即可简单、快速测定

使用 3 点标准曲线即可简单、快速测定

所需样本体积

10 或 20 µL

1-20 mL

兼容性

洗涤剂
还原剂(例如 TCEP、DTT)

还原剂(例如 TCEP、DTT)

不兼容性

甘氨酸

洗涤剂(如 SDS、吐温 20、Triton X-100)

初始样本范围

100 µg/mL 至 20 mg/mL

12.5 µg/mL 至 5 mg/mL

定量范围

1-400 µg

0.25-5 µg

货编号

A50668 (100 次检测)
A50669(500 次检测)

Q33211(100 次检测)
Q33212(500 次检测)

* Qubit 蛋白检测支持旧型号Qubit、Qubit 2 和 Qubit 3。


宽动态范围

与 Bradford 检测等标准检测相比,Qubit 蛋白检测的动态范围较大,且可直接使用大多数纯(未稀释)样本。这样就消除了传统蛋白质定量方法中的估算和稀释步骤。

Qubit 蛋白检测提供的动态范围比 Bradford 检测等标准蛋白检测更大。Qubit 蛋白质检测可精确定量浓度最低 12.5 μ g/mL 的蛋白质,而 Qubit 蛋白质 BR 检测(兼容 Qubit 4 荧光仪)的定量范围高达 20,000 μg/mL。


简单、快速的定量

Qubit 蛋白质检测简单易行,仅需 2-3 个标样即可轻松设置,而传统检测方法通常要 5-7 点的标准曲线才能定量蛋白。

Qubit 蛋白质 BR 检测工作流程

Qubit 蛋白质检测工作流程


蛋白质的准确定量

蛋白质的组成和结构千变万化。氨基酸序列、等电点 (pI)、二级结构和侧链或辅基的差异都可导致定量数值的变化。与 Bradford 检测等传统检测相比,Qubit 蛋白质 BR 检测可以提供精确的蛋白质定量,且结果对不同的蛋白质来说变异较小。

 

当加载用于蛋白免疫印迹分析的电泳凝胶以研究蛋白表达时,准确的蛋白负荷至关重要。本试验中使用 Qubit 蛋白质 BR 检测和传统的 Bradford 蛋白检测测量了五种不同细胞裂解物的 10 μg 蛋白负荷。非染色蛋白质标记试剂用于估算 iBright FL 1500 成像系统上的总蛋白泳道负荷。Qubit 蛋白质 BR 检测精确测定了裂解物的蛋白质浓度,且负荷间 变异系数 (CV) 为 11%变异,而 Bradford 检测结果的变异性更高,其 CV 为 28 %。

复杂蛋白质混合物中的蛋白质负荷的准确测定

使用 Qubit 蛋白质 BR 检测和标准 Bradford 检测确定几种哺乳动物细胞裂解物中的蛋白质浓度:293T、A549、HepG2、HeLa 和 iPSCs。裂解物使用 Invitrogen NuPAGE 4–12% Bis-Tris Mini 蛋白质凝胶分离并用非染色蛋白质标记试剂标记。(A) 使用 iBright FL1500 成像系统采集的凝胶图像以及 (B) 使用 Invitrogen iBright 分析软件确定的归一化因子。Qubit 蛋白 BR 检测的 CV 显著低于 Bradford 检测。


缓冲液兼容性表

Qubit 蛋白检测试剂与常用缓冲液组分的兼容性

污染物

Qubit 蛋白质 BR 检测

Qubit 蛋白质检测

样本中的兼容浓度

β-巯基乙醇

1 mM

10 mM

乙腈

20%

 

硫酸铵

200 mM

50 mM*

Bicine

100 mM

 

硼酸盐 (50 mM pH 8.5)

 

B-PER 试剂

 

CHAPS

5%

 

碳酸盐-碳酸氢盐

 

DTT

5 mM

10 mM*

二甲基亚砜

10%

 

EDTA

50 mM

10 mM

葡萄糖

1 M

 

甘油

10%

10%*

盐酸胍

4 M

 

咪唑

200 mM

12.5 mM

I-PER

 

Mem-PER

 

MES

125 mM

 

MOPS

100 mM

 

M-PER

 

醋酸钠

100 mM

 

叠氮化钠

 

10 mM

氯化钠

5 M

200 mM*

NE-PER (CER)

 

NE-PER (NER)

 

NP-40

5%

Ø

磷酸盐缓冲液 (PBS),pH 7.4

10 mM KPO4,150 mM NaCl*

磷酸钾,pH 7.4

 

5 mM

PMSF

1 mM

 

RIPA

 

SDS

5%

0.1%*

蔗糖

20%

500 mM

T-PER

 

Tricine 体系

50 mM

 

Tris- 缓冲盐水 (TBS)

 

Tris-甘氨酸,pH 8.0

Ø

 

Tris-甘氨酸 SDS, pH 8.3

Ø

 

Tris-HCl

500 mM

 

Tris-HEPES SDS,pH 8.0

 

Triton X-100

5%

Ø

吐温 20

3%

Ø

尿素

3 M

 

Y-Per

Ø

 

GPCR 提取&稳定试剂

1:2

 

细胞表面蛋白分离试剂盒

 

* 可接受结果,但标准曲线部分失真。若要获得最佳结果,在标样中添加等量污染物。

 

方法Qubit 蛋白质 BR 检测和 Qubit 蛋白质检测按含常用缓冲液和污染物的 1,000 μ g/mL BSA 样本的说明执行。检测重复三次,且将 RFU 值与 0.9 % NaCl、0.05 % NaN3 中 BSA 的值进行比较。如果物质存在导致的蛋白质浓度估计误差低于 10 % ,则视为检测在指示浓度下与检测物质相容。所列举的浓度指的是蛋白质样本中的实际浓度。Ø 代表在最低测试浓度下不兼容的化合物。空白字段代表化合物未经该检测测试。

兼容性测试所用的缓冲液配方

缓冲液

配方

碳酸钠-碳酸氢钠,pH 9.4

0.2 M 碳酸氢钠-碳酸氢钠,pH 9.4

磷酸盐缓冲液 (PBS)

100 mM 磷酸钠,150 mM NaCl, pH 7.2

RIPA 裂解液

25 mM Tris,150 mM NaCl,1% DOC,1% NP-40,0.1% SDS,pH 7.6

Tris- 缓冲盐水 (TBS)

25 mM Tris,150 mM NaCl, pH 7.4

Tris-甘氨酸,pH 8.0

25 mM Tris,192 mM 甘氨酸,pH 8.0

Tris-甘氨酸-SDS,pH 8.3

25 mM Tris,192 mM 甘氨酸,0.1% SDS,pH 8.3

Tris-HEPES-SDS

100 mm Tris,100 mm HEPES,3 mm SDS


仅供科研使用。不可用于诊断程序。