灵敏的特异性核酸和蛋白质定量检测

Invitrogen Qubit 检测使用靶标选择性染料,只有与 DNA 、 RNA 或蛋白质靶结合时才会发射荧光。它们比传统的紫外吸光法更准确。传统的紫外吸光法会因盐、溶剂、洗涤剂、蛋白至以及游离核苷酸等污染物的影响而过高估计样品浓度。荧光测量法也比紫外吸光法的灵敏度高很多,而 Qubit 荧光仪能够在显著降低的噪音下准确测量稀释的样品。

提示:对于高通量的定量分析,请考虑使用具有荧光功能的酶标仪。Thermo Scientific Fluoroskan 微孔板荧光计 和 Varioskan LUX 多功能酶标仪 Quant-iT 测定  兼容,可定量分析与 Qubit 荧光计和测定试剂盒相同的分析物。有关产品比较信息,请参阅我们的 RNA/DNA 定量页面


特点

虽然 Qubit 检测取决于所测量的分析物,但其共性使其具有选择性、灵敏性及与 Qubit 4 或 Flex 荧光仪配合使用的易用性。

染料可选择性地结合 DNA 、 RNA 或蛋白质

与紫外吸光度和传统 Bradford 蛋白质检测相比更灵敏

染料只有与靶结合时才会发射荧光

最大程度减少降解 DNA 或 RNA 等污染物的影响

易于操作

简单的混合后读取形式

培养时间短

DNA 和 RNA 检测仅需 2 分钟,蛋白质检测仅需 10-15 分钟

为 Qubit 荧光仪而设计

为用于 Qubit  4 和 Qubit Flex 荧光仪而优化

检测定量范围对比

Qubit 检测可用于双链和单链 DNA (dsDNA 及 ssDNA)、RNA 、microRNA 和蛋白质。Qubit DNA 和 RNA 检测提供不同的定量范围。HS(高灵敏度)检测可以定量最低浓度的分析物。 BR(宽范围)检测可以在更大的范围内定量。RNA XR(扩展范围)检测则是高丰度样品的理想选择。多样的检测范围支持更大浓度范围内的准确测量。如图所示,与紫外吸光法相比,Qubit HS 和 BR 检测可检出更低浓度的 分析物。

Qubit 荧光法和紫外吸收法的样品浓度范围

使用 Qubit 系统进行荧光定量的灵敏度极高,可以对低丰度样品进行定量,并且只会测量目标靶,即使样品中同时包含 DNA 和 RNA。标准的紫外吸光法不足以检测低浓度的分析物,并且不能区分 RNA 与 DNA,而是会定量样品中的所有核酸。

此外,使用 Qubit 系统的荧光定量可以区分同一样品中的 RNA 和 DNA ,而紫外吸收度法则通常无法做到。Qubit 平台提供的全面解决方案对检测、耗材和仪器进行联合优化,从而实现了最佳性能,让您对结果的可靠性充满信心。


DNA 定量试剂

Qubit dsDNA 检测提供两个定量范围(HS 和 BR)和两种形式(标准品和 1X),其都是下游应用和处理的重要因素。此外还还提供用于定量 ssDNA 和寡核苷酸的检测。

DNA 定量试剂

产品

初始样品浓度

定量范围

检测数

货号

高灵敏度 dsDNA 检测

Qubit 1X dsDNA HS 检测试剂盒

0.005–120 ng/µL

0.1–120 ng

100

Q33230

500

Q33231

Qubit dsDNA HS 检测试剂盒

0.005–120 ng/µL

0.1–120 ng

100

Q32851

500

Q32854

Qubit 1X dsDNA HS 检测 λ 标准品

500

Q33233

宽范围 dsDNA 检测

Qubit 1X dsDNA BR 检测试剂盒

0.2–4,000 ng/µL

4–4,000 ng

100

Q33265

500

Q33266

Qubit dsDNA BR 检测试剂盒

0.2–2,000 ng/µL

4–2,000 ng

100

Q32850

500

Q32853

Qubit 1X dsDNA BR 检测 λ 标准品

500

Q33263

ssDNA 检测

Qubit ssDNA 检测试剂盒

0.01–240 ng/µL

0.2–240 ng

100

Q10212

dsDNA 定量检测

相对于 RNA 和 ssDNA,我们的 Qubit dsDNA 高灵敏度 (HS) 和宽范围 (BR) 检测对 dsDNA 具有高度选择性。高灵敏度分析专为低浓度 dsDNA 样品而设计,有助于节省珍贵样品。dsDNA HS 和 BR 检测可很好的兼容盐、游离核苷酸、RNA、溶剂、洗涤剂或蛋白质等常见污染物。

Qubit dsDNA HS 检测结果

 

Qubit 4(显示)或 Qubit Flex 荧光仪上的结果可以数字或图形方式显示。这些图像显示了我们设计用于低 DNA 浓度样本的高灵敏度 (HS) dsDNA 检测。

本测试中使用 Qubit dsDNA HS 和 BR 检测评估了 Qubit 4 和 Flex 荧光仪以及竞品仪器的准确度和精度。Qubit 4 和 Flex 仪器的百分比偏差和 CV 值均低于竞品,表现出更高的准确度和精度。

Qubit 荧光仪的准确度和精度。

准确度可通过使用 Qubit dsDNA HS 检测确定相对真实浓度的平均偏差而评价,而精度可使用 Qubit dsDNA BR 检测确定各浓度下重复的 CV 值而确定。低偏差百分比证明了 Qubit Flex 和 Qubit 4 荧光仪的准确度,而低 CV 百分比则证明了其精度,特别是对 Qubit Flex 型号来说。在所测试的三台仪器中,竞品仪器的准确度和精度最低。

Qubit 1X 检测形式不仅省时而且对环境友好

Qubit 1X dsDNA 检测以便捷的预混合形式提供,无需制备 Qubit 工作溶液。您只需在预混溶液中添加样本或标准品,然后进行培养,即可读取结果。这种形式提供了简化、快速的工作流程,同时减少了试剂盒中的试管数(以及所使用塑料的数量)。

 

Qubit 1X dsDNA HS 检测具有与标准 dsDNA HS 检测相同的动态范围和检测限,但其动态范围比标准 dsDNA BR 检测更高,可实现最高 4,000 ng/µL 的扩展范围。

 

在 Qubit 1X dsDNA HS(左)和 BR(右)检测的核心范围内进行测试时,测得的 dsDNA 数量与预期值相差小于 10 % ,即使同时存在等量的 RNA 。

A) Qubit 1X dsDNA HS 检测

B)  Qubit 1X dsDNA BR 检测

Qubit 1X dsDNA HS (A) 和 BR (B) 检测的选择性

图中显示了与预期值相比的接种已知数量 DNA 和 RNA 的样品的定量结果。圆圈代表 10 μL DNA 加 190 μ L 不同浓度工作溶液的样品。方块代表 10 μL RNA 和 10 μL DNA 加 180 μ L 不同浓度工作溶液的样品。圆圈和方块距离很近,甚至在有些情况下几乎无法区分,表明这两种 dsDNA 检测受 RNA 的影响极小。

ssDNA 定量检测

Qubit ssDNA 检测试剂盒设计用于定量长 ssDNA 或寡核苷酸。因其也可检测 dsDNA 和 RNA,请在检测前提纯 ssDNA。 但是,检测结果不受常见污染物的影响,如盐、短寡核苷酸(≤6 个碱基)、游离核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质。


RNA 定量检测

有三种 Qubit RNA 检测可用于定量不同浓度范围的大 RNA,且有一种检测可用于定量小 RNA 分子 (microRNA)。有关测量 RNA 样品完整性和质量的其他检测方法,请参见下一节RNA IQ 检测

大 RNA 定量检测

产品

初始样品浓度

定量范围

检测数

货号

常规 RNA 检测

Qubit RNA HS 检测试剂盒

0.2–200 ng/µL

4–200 ng

100

Q32852

500

Q32855

Qubit RNA BR 检测试剂盒

0.5–1,200 ng/µL

10–1,200 ng

100

Q10210

500

Q10211

Qubit RNA XR 检测试剂盒

5–20,000 ng/µL

100–20,000 ng

100

Q33223

500

Q33224

microRNA 检测

Qubit microRNA 检测试剂盒

0.025–150 ng/µL

0.5–150 ng

100

Q32880

500

Q32881

RNA 定量检测

定量 RNA 时,您可以在初始样品浓度范围重叠的三种 Qubit RNA 检测试剂盒中进行选择,即 250 pg/μL - 10,000 ng/μL。相对于双链 DNA (dsDNA),这些试剂盒对于 RNA 具有高度选择性。与其他 RNA 检测不同,该检测不需要 DNA 酶也可准确测量,即使样品中存在 DNA。这些检测可完美兼容盐、游离核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质等常见污染物。

 

在这一灵敏度测试中,Qubit RNA 和 microRNA 检测(红色和蓝色条)与靶 RNA (红色和蓝色线)的实际浓度非常接近。

Qubit RNA 和 microRNA 检测的灵敏度

将 x 轴上所列浓度的核糖体 RNA (rRNA) 添加到含有 2μg/mL siRNA 的样品中。然后 使用 Qubit microRNA 检测 Qubit RNA 检测和通过紫外吸光度定量的 NanoDrop A260 检测对混合物进行检测。计算和显示 8 个重复结果的平均值和标准差。NanoDrop 仪器(紫色条)的总 RNA 浓度检测限是 1.5 μg/mL,影响了其中较低浓度下的准确度和精度。Qubit RNA 检测(红色条)在较大范围内准确定量了 rRNA 浓度。Qubit microRNA 检测(蓝色条)准确定量了 2 μg/mL 的 siRNA 浓度,而随着 rRNA 浓度提高到 2-5 倍时,准确度略受影响。蓝色和红色趋势线分别指示了样本中的 siRNA 和 rRNA 的实际浓度。

microRNA 定量检测

Invitrogen Qubit microRNA 检测试剂盒设计用于对 microRNA 等小 RNA(17–25 nt 或 bp)轻松、精确地定量,即使存在盐、游离核苷酸、溶剂、洗涤剂或蛋白质等常规污染物等也可完成测定。相对于 rRNA或较大的信使 RNA (mRNA ) (>1,000 bp),该检测对于 小RNA 具有高度选择性。

 

提纯样品中的小 RNA 可在检测管中低至 0.5 ng 的水平下可重复定量。该检测可检测所有类型的小 RNA 、包括 microRNA 和短干扰 RNA (siRNA),且单链和双链均可。因其不检测核苷酸,所以也可区分小 mRNA 颗粒与完全降解的 RNA 。


RNA 完整性及质量 (IQ) 检测

Qubit RNA IQ 检测的开发是为了快速评价 RNA 样本的完整性和质量 (IQ)。它使用两种染料:一种结合较大的完整和/或结构化 RNA,而另一种结合较小的降解 RNA。此检测无需特殊处理、繁琐的样本制备或等待结果。

RNA 质量检测

产品

检测数

货号

Qubit RNA IQ 检测试剂盒

75

Q33221

275

Q33222

Qubit RNA IQ 标准品

1 套

Q33235


蛋白质定量检测

Qubit 蛋白质检测试剂盒让蛋白质的定量更加轻松、准确。这两种试剂盒拥有重叠的浓度范围,可在 12.5μg/mL 到 20 mg/mL 的初始样品浓度内保持准确,且结果对不同的蛋白质来说变异较小。Qubit 蛋白质检测易于操作,仅需 10-15 分钟的室温培养,无需长时间培养或暴露于高温下。

蛋白质定量检测

产品

初始样品浓度

定量范围

检测次数

货号

Qubit 蛋白测定试剂盒

12.5 µg/mL–5 mg/mL

0.25-5 µg

100

Q33211

500

Q33212

Qubit 蛋白质 BR 测定(仅限 Qubit 4)

100 µg/mL–20 mg/mL

1-400 µg

100

A50668

500

A50669

 


内毒素检测测定

Qubit 内毒素检测测定旨在与 Qubit Flex 荧光计结合使用,可进行高效的荧光终点测定,以定量蛋白质、多肽、抗体或核酸样品等多种样品类型中的内毒素。可以使用不同的样品量进此测定,通过简化的工作流程实现 0.01-10.0 EU/mL 的动态范围。Qubit 内毒素检测测定试剂盒的主要特点和优势包括:

  • 灵敏度高且测定范围广—可检测低至 0.01 EU/mL 至 10.0 EU/mL 的样品量水平
  • 适用于多种样品—包括蛋白质、质粒制备物、DNA 和 RNA
  • 易于使用—与 Qubit Flex 荧光计结合使用时,自动执行计算,有助于减少出错的可能性

 

内毒素检测测定

 
产品单位规格货号

Qubit 内毒素检测测定试剂盒*

80次测定

Q32891

Qubit Flex 无热原联管

120 联管Q32893

 

* 在初次使用 Qubit Flex 测定前,先使用 Qubit Flex 系统验证测定试剂盒(货号 Q33254
 


系统验证检测

Invitrogen Qubit 系统验证试剂盒是一款快速、易用、基于试剂的检测,可检测 Qubit 4 和 Qubit Flex 荧光仪的性能。其三个组分包括一个空白试剂溶液、一种绿色荧光试剂和一种远红外荧光试剂。绿色荧光试剂在荧光仪上专门检测蓝色激发光(470 nm LED;430-495 nm 激发滤光片)和绿色荧光(510-580 nm 发射滤光片),而远红外荧光试剂则专门检测红色激发光(635 nm LED;600-645 nm 激发滤光片)和远红外荧光(665-720 nm 发射滤光片)。

系统验证检测

产品

初始样品浓度

定量范围

检测次数

货号

Qubit 4 系统验证测定试剂盒

不适用

不适用

50

Q33237

Qubit Flex 系统验证测定试剂盒

不适用

不适用

25

Q33254

 

注:各 Qubit 系统验证测定试剂盒仅可与其指定的 Qubit 荧光计结合使用,不能与其他荧光计结合使用。


MyQubit 自定义和预配置检测

自定义MyQubit 检测允许您在几分钟内为 Qubit 荧光仪创建更多的检测项目。任何在光谱上与 Qubit 硬件兼容的试剂或检测均可用于 Invitrogen Qubit 荧光仪。此外也提供几种预先配置的 MyQubit 检测供您下载。

创建新的 MyQubit 检测

MyQubit 检测是可自定义的桌面型荧光检测平台,可满足多种定量检测需求,包括实验室研究、质控、工艺监测及更多应用。您只需简单地下载 .qbt 文件并使用 USB 驱动器传输,即可为 Qubit 3.0 和 4 型荧光仪中添加新检测。

MyQubit 检测设计工具

MyQubit 检测设计工具可帮助您创建自定义 MyQubit 检测 .qbt 文件,以便上传至您的 Qubit 3.0 和 4 荧光仪。

下载预配置的 MyQubit 检测项目

我们开发的各类自定义 MyQubit 检测中,包括适用于多种使用 Amplex Red 试剂的常用定量分析物的新 MyQubit 检测。在您使用 USB 驱动器将检测的 .qbt 文件传输至 Qubit 荧光仪后,即可与出厂预置的 Qubit 检测一同供您选择,从而扩展了 Qubit 荧光仪的功能。

可用于下载的预配置 MyQubit 检测

检测

下载 Qubit 3.0 和 4

下载 Qubit 2.0*

PDF 手册

Amplex Red 胆固醇检测

.qbt 文件

.qbt 文件

Amplex 胆固醇检测手册

Amplex Red 半乳糖检测

.qbt 文件

.qbt 文件

Amplex Red 半乳糖检测手册

Amplex 葡萄糖检测

.qbt 文件

.qbt 文件

Amplex 葡萄糖检测手册

Amplex Red 谷氨酸检测

.qbt 文件

.qbt 文件

Amplex Red 谷氨酸检测手册

Amplex Red 过氧化氢检测

.qbt 文件

.qbt 文件

Amplex Red 过氧化氢检测手册

Amplex Red 蔗糖检测

.qbt 文件

.qbt 文件

Amplex Red 蔗糖检测手册

 

* Qubit 2.0 荧光仪需要 2 GB 或更少的 USB 驱动器(如仪器随附的驱动器)才能传输 MyQubit 文件。

 

若要下载 .qbt 文件,请点击表格中所需的 .qbt 文件链接。 它将自动下载到您的计算机。确保您点击了对应于您的 Qubit 型号的正确链接。有关将 .qbt 文件上传至 Qubit 荧光仪的说明,请参阅检测的 PDF 手册。


Ion Sphere 质量控制试剂盒

下一代测序 (NGS) 的 Ion Torrent 方法中,会在模板制备过程中于一个 Ion Sphere 微粒 (ISP) 上创建各扩增子的多份拷贝。测序 DNA 或 RNA 之前,必须获知阳性模板 ISP 的数量。

 

在 Ion Personal Genome Machine (PGM) 或 Ion GeneStudio 系统上运行 NGS 前,可在 Qubit  荧光仪上使用 Ion Sphere 质控试剂盒对富集的 ISP 快速简单评估。 所有 ISP 都会与绿色荧光染料 Invitrogen Alexa Fluor 488 标记的互补寡核苷酸结合,而只有阳性模板的磁珠会与红色荧光染料 Invitrogen Alexa Fluor 647 标记的互补寡核苷酸结合。

Ion Sphere 检测

产品

检测数

货号

Ion Sphere 质控试剂盒 (仅限 Qubit 4)

20

4468656

 

Qubit 荧光仪可检测各染料共轭体的荧光发射,并使用 Excel 文件模板而根据 Alexa Fluor 647 染料与 Alexa Fluor 488 染料信号的比例来计算阳性模板 ISP 的百分比。这一使用 Qubit 荧光仪的质控步骤有助于判断成功进行测序的可能性,从而最终节省后续测序的时间和费用。

Ion Sphere 颗粒检测原理

B 核酸序列同时存在于 ISP 引物及模板中,用于驱动模板在磁珠上的扩增,而 A 序列只存在于模板中。使用 Invitrogen Alexa Fluor 染料后,由 Alexa Fluor 647 (红色)及 Alexa Fluor 488 (绿色)染料标记的核苷酸的荧光信号比例,可用于确定阳性模板微粒的相对数量。


仅供科研使用。不可用于诊断程序。