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在蛋白质酶解后,肽段的富集(Enrichment)和/或分馏(Fractionation)通常是检测低丰度蛋白肽段或降低样本复杂性的必要步骤。提升目标蛋白鉴定率的常用策略包括:翻译后修饰(PTM)特异性富集, 例如:磷酸化肽段富集;或分馏技术, 例如:根据肽段疏水性差异分离的高pH反相色谱法。
创新的Thermo Scientific ™ActivX™探针与富集试剂盒能特异性地靶向多种酶类,包括激酶、GTP 酶和丝氨酸水解酶,通过在蛋白质水平对其活性位点进行共价标记,并在酶解后实现高效富集。
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|---|---|---|---|---|---|
| Fe-NTA 磷酸肽富集试剂盒 | TiO2 磷酸肽富集与纯化试剂盒 | 磁性TiO2 磷酸肽富集试剂盒 | 高pH 反相分馏试剂盒 | 含ATP 探针的激酶富集试剂盒 | |
| 靶向目标 | 磷酸肽 | 磷酸肽 | 磷酸肽 | 所有肽段 | ATP 结合位点 |
| 结合/标记机制 | 金属螯合物对磷酸基团的亲和力 | 金属氧化物对磷酸基团的亲和力 | 金属氧化物对磷酸基团的亲和力 | 疏水相互作用 | 生物素化ATP类似物与活性位点赖氨酸结合 |
| 富集策略 | IMAC-琼脂糖树脂 | 多孔球形TiO2材料
| TiO2包被磁性颗粒 | 疏水聚合物树脂 | 固定化链霉亲和素琼脂糖树脂 |
| 负载量/反应* | 0.5–5 mg | 0.5–3 mg | 100 µg | 10–100 µg | 冻干粉 |
| 形式 | 离心柱 | 吸头 | 磁珠 | 离心柱 | 离心柱 |
| #洗脱组分数量 | 1 | 1 | 1 | 8 | 1 |
| 处理时间 | 45–60 分钟 | 45–60 分钟 | 15 分钟 | 30–60 分钟 | 6.5 小时 + 酶解 |
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*每个反应的负载量基于典型的哺乳动物培养细胞蛋白质消化样品。
Thermo Scientific™ Pierce™ Fe-NTA磷酸肽富集试剂盒可高效捕获含多个磷酸基团的磷酸肽。
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 总数 | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| TiO2 | 492 | 103 | 8 | 4 | 0 | 1 | 608 |
| Fe-NTA IMAC | 234 | 34 | 216 | 3 | 1 | 0 | 488 |
| 重叠部分 | 155 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 156 |
通过TiO2与Fe-NTA IMAC对单磷酸化和多磷酸化肽段的选择性富集。基于重复实验的平均磷酸肽富集结果,展示两种方法分别富集的含 1个或多个磷酸基团 的磷酸肽数量。肽段谱图总结结果从 Proteome Software Scaffold 3.0 导出,并通过 Microsoft™ Excel™ 软件 分析。
关键结论
Thermo Scientific™ Pierce™ Fe-NTA磷酸肽富集试剂盒可高效捕获含多个磷酸基团的磷酸肽。
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 总数 | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| TiO2 | 492 | 103 | 8 | 4 | 0 | 1 | 608 |
| Fe-NTA IMAC | 234 | 34 | 216 | 3 | 1 | 0 | 488 |
| 重叠部分 | 155 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | 156 |
通过TiO2与Fe-NTA IMAC对单磷酸化和多磷酸化肽段的选择性富集。基于重复实验的平均磷酸肽富集结果,展示两种方法分别富集的含 1个或多个磷酸基团 的磷酸肽数量。肽段谱图总结结果从 Proteome Software Scaffold 3.0 导出,并通过 Microsoft™ Excel™ 软件 分析。
关键结论
仅供科研使用,不可用于诊断目的。
