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通过免疫亲和层析方法降低血清、血浆或生物体液等复杂样本的蛋白质组学分析难度,特异性去除样本中高浓度的白蛋白(Albumin)、免疫球蛋白(IgG)等干扰蛋白,显著提升低丰度蛋白质在发现型与靶向型蛋白质组学研究中的检测灵敏度。
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|---|---|---|---|
Pierce白蛋白去除试剂盒 | High-Select HSA/免疫球蛋白去除离心柱 | High-Select Top14 高丰度蛋白去除离心柱 | |
| 去除蛋白种类 | 白蛋白 | 白蛋白, IgG, IgG (轻链), IgA, IgM, IgD, IgE | 14 种高丰度蛋白* |
| 样品处理量 | 10–50 µL | 10 μL (mini) 或 100 μL (midi) | 10 μL (mini) 或 100 μL (midi) |
| 处理时间 | 20–30 min | 5–10 min | 5–10 min |
| 产品形式 | 散装填料、离心柱、缓冲液 | 预装型mini 或midi离心柱,散装填料 | 预装型 mini或midi 离心柱,散装填料 |
*Top14蛋白质包含白蛋白、IgG、IgG轻链、IgA、IgM、IgD、IgE、α1-酸性糖蛋白、纤维蛋白原、结合珠蛋白、α1-抗胰蛋白酶、α2-巨球蛋白、转铁蛋白、载脂蛋白A-I
图1. 使用High-Select高丰度蛋白去除离心柱实现的蛋白去除效果。(A) 靶向质谱定量分析:通过靶向质谱(Targeted MS)测定各蛋白去除率。(B)采用 ELISA检测高丰度蛋白去除率,去除率>99%。免疫球蛋白覆盖范围:IgG(含KappaXL与Lambda型)、IgA、IgM、IgD、IgE。
图2. High-Select高丰度蛋白去除离心柱性能验证。上样10~20 μL人血清(货号31876)至离心柱,按标准流程操作。使用Pierce BCA蛋白质定量试剂盒(Thermo Fisher Scientific,货号23225)测定去除后样本总蛋白量。采用AssayMax™人白蛋白ELISA试剂盒(Assaypro,货号EA2201-1)检测去除后样本白蛋白残留定量分析。FT=流穿液(如去除高丰度蛋白后的样本);E=洗脱液(如被填料结合的蛋白及柱内亲和抗体)。结果显示,使用Top14高丰度蛋白去除后,低丰度蛋白条带在去除后样本泳道(FT)中清晰可见。
图3. 高丰度蛋白去除增强独特蛋白质鉴定能力。样本分三组:(a) 未处理正常人血浆,(b) HSA/免疫球蛋白去除处理,(c) Top14高丰度蛋白去除处理。所有的样品都在还原/烷基化后,采用胰蛋白酶酶解, 随后在Orbitrap Fusion Tribrid质谱仪上进行LC-MS分析,参数为60分钟梯度洗脱,每次进样750 ng(三次重复)。最后使用Thermo Scientific Proteome Discoverer 1.4软件匹配人蛋白质数据库。结果显示,非冗余蛋白组鉴定数:Top14去除组(c)显著高于未处理组(a)及HSA/免疫球蛋白去除组(b)。
图1. 使用High-Select高丰度蛋白去除离心柱实现的蛋白去除效果。(A) 靶向质谱定量分析:通过靶向质谱(Targeted MS)测定各蛋白去除率。(B)采用 ELISA检测高丰度蛋白去除率,去除率>99%。免疫球蛋白覆盖范围:IgG(含KappaXL与Lambda型)、IgA、IgM、IgD、IgE。
图2. High-Select高丰度蛋白去除离心柱性能验证。上样10~20 μL人血清(货号31876)至离心柱,按标准流程操作。使用Pierce BCA蛋白质定量试剂盒(Thermo Fisher Scientific,货号23225)测定去除后样本总蛋白量。采用AssayMax™人白蛋白ELISA试剂盒(Assaypro,货号EA2201-1)检测去除后样本白蛋白残留定量分析。FT=流穿液(如去除高丰度蛋白后的样本);E=洗脱液(如被填料结合的蛋白及柱内亲和抗体)。结果显示,使用Top14高丰度蛋白去除后,低丰度蛋白条带在去除后样本泳道(FT)中清晰可见。
图3. 高丰度蛋白去除增强独特蛋白质鉴定能力。样本分三组:(a) 未处理正常人血浆,(b) HSA/免疫球蛋白去除处理,(c) Top14高丰度蛋白去除处理。所有的样品都在还原/烷基化后,采用胰蛋白酶酶解, 随后在Orbitrap Fusion Tribrid质谱仪上进行LC-MS分析,参数为60分钟梯度洗脱,每次进样750 ng(三次重复)。最后使用Thermo Scientific Proteome Discoverer 1.4软件匹配人蛋白质数据库。结果显示,非冗余蛋白组鉴定数:Top14去除组(c)显著高于未处理组(a)及HSA/免疫球蛋白去除组(b)。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。


