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序列特异性蛋白酶可用于将蛋白质切割为更小的片段(肽段)。胰蛋白酶是蛋白质酶解的常用工具,然而单独或序贯使用其他蛋白酶(如Glu-C、LysN、Lys-C、Asp-N或胰凝乳蛋白酶)可提升单个蛋白质的序列覆盖率,或为不同质谱应用生成独特肽段序列。Thermo Scientific Pierce蛋白酶经过高度纯化和修饰优化,专为蛋白质酶解设计,并通过质谱应用验证。Thermo Scientific EasyPep Mini 质谱样品制备试剂盒提供预配制试剂和稳健方法,可在3小时内制备出用于质谱分析的高质量样品。
该快速质谱样品制备试剂盒可在2-4小时内完成蛋白质提取、酶解及肽段纯化全流程。
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|---|---|---|---|---|
| 产品名称 | Pierce 胰蛋白酶,质谱级) | Pierce LysN 蛋白酶,质谱级 | Pierce 胰蛋白酶/Lys-C蛋白酶混合物,质谱级 | Pierce LysC 蛋白酶,质谱级 |
来源 | 猪胰腺提取物 | 灰树花(Grifola frondosa)提取物 | 猪胰腺提取物 + 溶酶杆菌(Lysobacter enzymogenes) | 溶酶杆菌(Lysobacter enzymogenes) |
| 切割特异性 | 精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)残基的羧基端 | 赖氨酸(Lys)残基的氨基端 | 精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)残基的羧基端 | 赖氨酸(Lys)残基的羧基端 |
| 是否修饰? | 是,经TPCK处理并甲基化 | 否 | 是 (胰蛋白酶); 否 (LysC) | 否 |
| 形式 | 冻干或冷冻 | 冻干 | 冻干 | 冻干 |
| 标准包装 | 20 或 100 µg/瓶 | 20 µg/瓶 | 20 或 100 µg/瓶 | 20 或 100 µg/瓶 |
| 立即订购 | 立即订购 | 立即订购 | 立即订购 |
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|---|---|---|---|
| 产品名称 | 糜蛋白酶(Chymotrypsin) | Glu-C 蛋白酶,质谱级 | Asp-N 蛋白酶,质谱级 |
| 来源 | 牛胰腺提取物 | 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) | 脆假单胞菌(Pseudomonas fragi) |
| 切割特异性 | 酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)及亮氨酸(Leu)的羧基端 | 谷氨酸(Glu)的羧基端 | 天冬氨酸(Asp)残基的氨基端 |
| 是否修饰? | 是(经TLCK处理) | 否 | 否 |
| 形式 | 冻干 | 冻干 | 冻干 |
| 标准包装 | 4 x 25 µg/瓶 | 10 µg/瓶 | 2 µg/瓶 |
| 立即订购 | 立即订购 | 立即订购 |
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|---|---|---|---|---|
| 产品名称 | Pierce 胰蛋白酶,质谱级) | Pierce LysN 蛋白酶,质谱级 | Pierce 胰蛋白酶/Lys-C蛋白酶混合物,质谱级 | Pierce LysC 蛋白酶,质谱级 |
来源 | 猪胰腺提取物 | 灰树花(Grifola frondosa)提取物 | 猪胰腺提取物 + 溶酶杆菌(Lysobacter enzymogenes) | 溶酶杆菌(Lysobacter enzymogenes) |
| 切割特异性 | 精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)残基的羧基端 | 赖氨酸(Lys)残基的氨基端 | 精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)残基的羧基端 | 赖氨酸(Lys)残基的羧基端 |
| 是否修饰? | 是,经TPCK处理并甲基化 | 否 | 是 (胰蛋白酶); 否 (LysC) | 否 |
| 形式 | 冻干或冷冻 | 冻干 | 冻干 | 冻干 |
| 标准包装 | 20 或 100 µg/瓶 | 20 µg/瓶 | 20 或 100 µg/瓶 | 20 或 100 µg/瓶 |
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|---|---|---|---|
| 产品名称 | 糜蛋白酶(Chymotrypsin) | Glu-C 蛋白酶,质谱级 | Asp-N 蛋白酶,质谱级 |
| 来源 | 牛胰腺提取物 | 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) | 脆假单胞菌(Pseudomonas fragi) |
| 切割特异性 | 酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)及亮氨酸(Leu)的羧基端 | 谷氨酸(Glu)的羧基端 | 天冬氨酸(Asp)残基的氨基端 |
| 是否修饰? | 是(经TLCK处理) | 否 | 否 |
| 形式 | 冻干 | 冻干 | 冻干 |
| 标准包装 | 4 x 25 µg/瓶 | 10 µg/瓶 | 2 µg/瓶 |
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使用 Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 混合物制备的肽段样本质量,与其他供应商的胰蛋白酶/Lys-C 混合物制备的蛋白样本相比相当甚至更优。
选择胶内消化(in-gel digestion)或溶液内消化(in-solution digestion)通常取决于样本量和/或样本复杂度。
溶液内消化推荐用于小体积、低至中等复杂度样本,更适配高通量样本处理需求。
对于高复杂度样本,胶内消化具有固有的优势,因为SDS-PAGE流程可同步实现蛋白变性、分离,并提供样本中蛋白相对丰度的可视化参考,但肽段回收率较溶液内消化低。
我们提供针对胶内与溶液内样本处理的完整试剂盒,满足不同实验需求。
| 蛋白质 | LysN | Trypsin | Merged |
|---|---|---|---|
| 膜突蛋白(Moesin) | 21% | 24% | 37% |
| Src底物皮层蛋白 | 25% | 10% | 30% |
| 谷氨酸脱氢酶1 | 16% | 12% | 28% |
| 环氧水解酶1 | 13% | 14% | 23% |
表中数据展示了 A549 细胞裂解液经 LysN 蛋白酶 或 胰蛋白酶 溶液内消化后,选定蛋白质的序列覆盖率百分比。合并覆盖率(Merged)表示通过 LysN 与胰蛋白酶分步消化 并结合 基于 CID(碰撞诱导解离)的 LC-MS/MS 分析 获得的综合结果。
仅供科研使用,不可用于诊断目的。
