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蛋白质组学自动化磁珠分离
通过磁珠分离提升蛋白质组学工作流程通量 (HTS)
速度和样本纯度是蛋白质组学研究人员的两大关注点，为此需要能够以更高通量处理样本和数据的策略。磁性颗粒包含方便的固体支持物，适用于基于亲和纯化的各类测定和程序。顺磁性微珠特别适合自动化程序，因为现有仪器可在96孔板内轻松混合、孵育和分离颗粒，无需色谱柱或离心。此类易操作性可以加速处理很多样本，并实现无缝集成和兼容整个工作流程。
通过自动化验证的 Pierce 磁珠
Pierce 磁珠是 1 μm 的小颗粒，可进行高通量筛选、纯化以及产出 ng–μg 蛋白的免疫沉淀。 或者，Pierce 磁性琼脂糖含有明显更大的 10–40 μm 颗粒且用于 mg–g 规模的高载量蛋白纯化。两种 Pierce 微珠类型均可在 KingFisher 仪器上自动处理或通过磁力架手动使用。
| 磁珠 | 亲和靶标 | 磁珠试剂盒 | 结合策略 | KingFisher 软件方案 |
|---|---|---|---|---|
| 抗 HA | HA 标签融合蛋白 | HA 标签磁性 IP/Co-IP 试剂盒 | 直接法 | |
| 抗 c-Myc | Myc 标签融合蛋白 | Myc 标签磁性 IP/Co-IP 试剂盒 | 直接法 | |
| Ni-NTA | His 标签融合蛋白 | 直接法 | ||
| NHS 酯 | 伯胺分子的共价固定 （蛋白、多肽等）用于亲和纯化 | 直接磁性 IP 试剂盒 | 直接法 | IP 方案 偶联方案 |
| 蛋白 A/G | 抗体（含 Fc 的 IgG） | 经典磁性 IP 试剂盒 交联磁性 IP 试剂盒 | 间接法 | |
| 蛋白 A | 抗体（含 Fc 的 IgG） | 间接法 | ||
| 蛋白 G | 抗体（含 Fc 的 IgG） | 间接法 | ||
| 蛋白 L | 抗体（含 κ 轻链的 Ig） | 间接法 | ||
| 链霉亲和素 | 生物素或脱硫生物素 | 间接法 | Flex 仪器 |
| 琼脂糖磁珠 | 亲和靶标 | 结合策略 | KingFisher 仪器方案 |
|---|---|---|---|
| 抗 DYKDDDDK | DYKDDDDK 标签融合蛋白 | 酸洗脱 肽洗脱 | |
| 谷胱甘肽 | 谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 融合蛋白 | ||
| Ni-NTA | His 标签融合蛋白 | 直接法 | |
| Ni-IMAC | His 标签融合蛋白（兼容 EDTA） | 直接法 （兼容 EDTA 的化学试剂） | |
| 蛋白 A/G | 抗体（含 Fc 的 IgG） | 间接法 |
| 磁珠 | 亲和靶标 | 磁珠试剂盒 | 结合策略 | KingFisher 软件方案 |
|---|---|---|---|---|
| 抗 HA | HA 标签融合蛋白 | HA 标签磁性 IP/Co-IP 试剂盒 | 直接法 | |
| 抗 c-Myc | Myc 标签融合蛋白 | Myc 标签磁性 IP/Co-IP 试剂盒 | 直接法 | |
| Ni-NTA | His 标签融合蛋白 | 直接法 | ||
| NHS 酯 | 伯胺分子的共价固定 （蛋白、多肽等）用于亲和纯化 | 直接磁性 IP 试剂盒 | 直接法 | IP 方案 偶联方案 |
| 蛋白 A/G | 抗体（含 Fc 的 IgG） | 经典磁性 IP 试剂盒 交联磁性 IP 试剂盒 | 间接法 | |
| 蛋白 A | 抗体（含 Fc 的 IgG） | 间接法 | ||
| 蛋白 G | 抗体（含 Fc 的 IgG） | 间接法 | ||
| 蛋白 L | 抗体（含 κ 轻链的 Ig） | 间接法 | ||
| 链霉亲和素 | 生物素或脱硫生物素 | 间接法 | Flex 仪器 |
| 琼脂糖磁珠 | 亲和靶标 | 结合策略 | KingFisher 仪器方案 |
|---|---|---|---|
| 抗 DYKDDDDK | DYKDDDDK 标签融合蛋白 | 酸洗脱 肽洗脱 | |
| 谷胱甘肽 | 谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 融合蛋白 | ||
| Ni-NTA | His 标签融合蛋白 | 直接法 | |
| Ni-IMAC | His 标签融合蛋白（兼容 EDTA） | 直接法 （兼容 EDTA 的化学试剂） | |
| 蛋白 A/G | 抗体（含 Fc 的 IgG） | 间接法 |
KingFisher 磁珠法核酸提取仪
使用 Thermo Scientific KingFisher 纯化系统从多种材料中高效制备样本，该系统提供非常通用的自动化磁珠法核酸提取以便从几乎任何来源中纯化 DNA/RNA、蛋白或细胞。这些系统采用革命性的磁珠法核酸分离技术，可实现出色的重现性和质量。Thermo Scientific BindIt 软件提供集成或远程控制 KingFisher 仪器的功能。即用型 BindIt 软件方案（.bdz 文件）适用于多种 Pierce 磁珠应用。
图1.高度可重现的 IgG 纯化。Pierce 蛋白 A 磁珠和 KingFisher 仪器用于在96深孔板的16个孔中从兔血清纯化 IgG。减少 SDS-PAGE 可得到纯化 IgG 的重链和轻链条带。所有孔的产量和纯度完全相同，这确认了微珠和仪器的高质量和重现性。
图2.在 KingFisher Flex 上进行的"Pierce 高载量 Ni-IMAC 磁珠"（兼容 EDTA）纯化的一致性。将含过度表达 His 标签 HSA（50 mg 总蛋白）的细胞培养上清液 (Expi293) 涂在96孔板中的 Pierce 高载量 Ni-IMAC 磁珠（兼容 EDTA）（10ul 沉淀磁珠）上。使用 KingFisher Flex 处理磁珠。所有的样本都进行了30分钟的结合。然后洗涤微珠两次，在洗脱缓冲液中孵育15分钟来洗脱结合的蛋白。在 SDS-PAGE 凝胶上分离洗脱液并使用 GelCode 蓝（货号24594）染色。凝胶泳道均经过归一化处理以使体积相等。
M = MW 标记物，L = 裂解物上样，1-12 = 板行的相应洗脱。CV <10%
自动化磁性蛋白纯化选择指南
自动化蛋白纯化工作流程
KingFisher 样本制备系统
仅供科研使用，不可用于诊断目的。