双色细菌活性检测

双色细菌活性检测

该试剂盒通过细胞膜完整性来评估细菌群体的活力。已经死亡或即将死亡的细胞会具有膜损伤，从而染为红色，具有完整膜的细胞将会染为绿色。

订购LIVE/DEAD BacLight 细菌活力检测试剂盒

此方案可以用于：

  • 利用荧光 显微镜分辨活细胞和死亡细胞

此方案不能用于：

  • 流式细胞仪

完成此方案需要以下材料：

细菌活性检测实验方案

细菌悬液的培养条件和制备

取 25 mL 细菌培养液于营养肉汤中培养至对数后期1.取 25 mL 细菌培养液于营养肉汤中培养至对数后期
以 10,000×g 的转速离心 10 分钟2.以 10,000×g 的转速离心 10 分钟
去除上清液3.去除上清液
将沉淀物在 2 mL 的 洗涤缓冲液重悬4.将沉淀物在 2 mL 的 洗涤缓冲液重悬
将 1 mL 的细胞悬液加入 20 mL 的洗涤缓冲液中稀释5.将 1 mL 的细胞悬液加入 20 mL 的洗涤缓冲液中稀释
室温孵育 1 小时6.室温孵育 1 小时，每 15 分钟混合一次
以 10,000×g 的转速离心 10 分钟7.以 10,000×g 的转速离心 10 分钟
将沉淀物在 20 mL 洗涤缓冲液中重悬8.将沉淀物在 20 mL 洗涤缓冲液中重悬
以 10,000×g 的转速离心 10 分钟9.以 10,000×g 的转速离心 10 分钟
将沉淀物在 10 mL 洗涤缓冲液中重悬10.将沉淀物在 10 mL 洗涤缓冲液中重悬

细菌活性检测方案提示

  • 打开前将样品瓶加热至室温并短暂离心
  • 在染色前清洗，除去细菌中的所有生长培养基
  • 磷酸盐洗涤缓冲液可能会降低染色效率，不建议使用

黄微球菌和蜡样芽孢杆菌用LIVE/DEAD Bac Light 细菌活性检测试剂盒染色
藤黄微球菌 和 蜡样芽孢杆菌 用 LIVE/DEAD BacLight 细菌活性检测试剂盒（货号 L7012）染色。当使用试剂盒提供的 SYTO 9 染色剂和 PI 核酸染色剂进行孵育时，具有完整细胞膜的活细菌将会发出绿色荧光，而细胞膜受损的死细菌则发出红色荧光。

对细菌染色

在微量离心管中联合使用等体积的 SYTO 9 和碘化丙啶1.在微量离心管中联合使用等体积的 SYTO 9 和碘化丙啶
向每毫升细菌悬液中加入 3 µL 染料混合液2.向每毫升细菌悬液中加入 3 µL 染料混合液
室温下暗处孵育 15 分钟3.室温下暗处孵育 15 分钟
用移液管吸取 5 µL 染色的细菌悬液放到载玻片上4.用移液管吸取 5 µL 染色的细菌悬液放到载玻片上，并盖上盖玻片
使用下列适当的滤光片进行细胞成像5.使用下列适当的滤光片进行细胞成像
光谱信息及存储条件
 SYTO 9碘化丙啶
激发/发射480/500 nm490/635 nm
标准滤光片组FITCTexas Red
储存条件≤20°C 避光储存。≤20°C 避光储存。