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多重荧光原位杂交 (FISH) 使您在单一标本中分析多种靶标并可视化共定位的信号成为可能。使用光谱上不同的荧光团标记每种杂交探针，这种方法让您有能力通过多色直观显示，解析数个遗传元件或多个基因表达模式。
们提供用于常规分析的 Invitrogen™ FISH Tag™ 检测试剂盒以及用于极稀有或低丰度靶标的 Invitrogen™ SuperBoost™ 试剂盒。
FISH Tag 检测试剂盒提供了您为了生成多重测定法用最佳 FISH 探针所需的标记试剂和缓冲液。在简单的实验方法中，切口平移法（用于 DNA 探针）或体外转录（用于 RNA 探针）用来酶促掺入胺修饰的核苷酸，继而用胺反应性 Invitrogen™ Alexa Fluor™ 染料作化学标记。 |  使用在果蝇胚胎全标本包埋中组合的 FISH Tag™RNA 与 酪酰胺信号放大进行多重 FISH 检测。 使用 带 Alexa Fluor 647 染料和 Alexa Fluor 555 染料的 FISH Tag RNA 试剂盒或多色试剂盒，检测 Krüppel （品红色）和rhomboid （橙色）的表达。 伴随荧光素标记的 RNA 探针 (ChromaTide 荧光素-12-UTP 进行 dpp 表达，并且用 抗荧光素/Oregon Green 染料 抗体（兔 IgG 级分，辣根过氧化物酶偶联物）和Alexa Fluor 499 酪酰胺试剂加以检测。 |
借助 10 至 200 倍于标准 ICC/IHC/ISH 法的灵敏度，SuperBoost 试剂盒为低丰度靶标的高分辨率成像提供卓越的信号放大以及清晰度和鲜明度。SuperBoost 将 Alexa Fluor 染料的亮度与可信任的聚 HRP 介导酪酰胺信号放大技术相结合，生成 2 至 10 倍于诸如 Invitrogen™ TSA™ 试剂或 TSA™ PLUS 试剂等标准解决方案的灵敏度。对于需要定义和清晰度的成像，用 SuperBoost 信号放大试剂盒让您的靶标从背景中脱颖而出。 |
用于常规分析的 FISH Tag 检测试剂盒
SuperBoost 信号放大检测试剂盒
| 标记的酪酰胺 (Ex/Em) |
酪酰胺 SuperBoost 试剂盒*
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|---|---|---|---|
抗小鼠 IgG（宿主：山羊）
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抗兔 IgG（宿主：山羊）
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链霉亲和素
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| Alexa Fluor 488 (495/519 nm) | B40912 B40941（50 张盖玻片） | B40922 B40943（50 张盖玻片） | B40932 |
| Alexa Fluor 555 (555/565 nm) | B40913 | B40923 | B40933 |
| Alexa Fluor 594 (591/617 nm) | B40915 B40942（50 张盖玻片） | B40925 B40944（50 张盖玻片） | B40935 |
| Alexa Fluor 647 (650/668 nm) | B40916 | B40926 | B40936 |
| Biotin-XX | B40911 | B40921 | B40931 |
| * 除非另有说明，否则为多达 150 张 18 mm x 18 mm 盖玻片提供足够的材料（若大多数关键孵育步骤中使用 150 µL）。可对大小不同的样品调整体积。 | |||
用于常规分析的 FISH Tag 检测试剂盒
SuperBoost 信号放大检测试剂盒
| 标记的酪酰胺 (Ex/Em) |
酪酰胺 SuperBoost 试剂盒*
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|---|---|---|---|
抗小鼠 IgG（宿主：山羊）
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抗兔 IgG（宿主：山羊）
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链霉亲和素
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| Alexa Fluor 488 (495/519 nm) | B40912 B40941（50 张盖玻片） | B40922 B40943（50 张盖玻片） | B40932 |
| Alexa Fluor 555 (555/565 nm) | B40913 | B40923 | B40933 |
| Alexa Fluor 594 (591/617 nm) | B40915 B40942（50 张盖玻片） | B40925 B40944（50 张盖玻片） | B40935 |
| Alexa Fluor 647 (650/668 nm) | B40916 | B40926 | B40936 |
| Biotin-XX | B40911 | B40921 | B40931 |
| * 除非另有说明，否则为多达 150 张 18 mm x 18 mm 盖玻片提供足够的材料（若大多数关键孵育步骤中使用 150 µL）。可对大小不同的样品调整体积。 | |||
样品实验方法
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| 果蝇胚胎上的四色荧光原位杂交。 用四个不同的 RNA 探针探测晚胚盘期（核周期 14）胚胎。
蓝色：将
sog 用 DNP、继而用
Alexa Fluor 647 鸡抗兔 IgG 抗体标记，该抗体用
兔抗二硝基苯-KLH IgG 抗体检测。绿色：将
ind用生物素、继而用链霉素亲和素 HRP 和 Invitrogen™ Alexa Fluor™ 350 酪酰胺标记。红色：将
msh 用地高辛、继而用
Alexa Fluor 488 驴抗绵羊 IgG 抗体标记，该抗体用绵羊抗地高辛抗体检测。黄色：将
sna 用荧光素、继而用
Alexa Fluor 555 山羊抗小鼠 IgG 抗体标记，该抗体用小鼠抗荧光素抗体检测。图片系加州大学圣地亚哥分校 Dave Kosman 和 Ethan Bier 贡献。
| 通过用五种 RNA 探针进行荧光 原位 杂交 (FISH)同时检测全标本包埋果蝇胚胎中五个基因的表达。
红色：使用
氨基烯丙基 UTP 和
Alexa Fluor 647琥珀酰亚胺酯标记
sog。绿色：将 ind 用 DNP、继而用
兔抗二硝基苯 -KLH IgG 抗体 标记，该抗体用
Zenon Alexa Fluor 555 兔 IgG 标记试剂盒预标记。蓝色：将 en 用生物素标记并用 HRP-链霉素亲和素和 Invitrogen™ Alexa Fluor™ 405 酪酰胺检测）。黄色：将 wg 用地高辛标记且用绵羊抗地高辛 IgG 抗体和
Alexa Fluor 594 驴抗绵羊 IgG 抗体检测。品红色：将 msh 用荧光素标记并用
小鼠抗荧光素 /Oregon Green IgG2a 抗体和
Alexa Fluor 488 山羊抗小鼠 IgG 抗体检测。图片系加州大学圣地亚哥分校 Dave Kosman 和 Ethan Bier 贡献。
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| 通过酪酰胺信号放大检测到 α 卫星探针与人第 1 号、第 15 号和第 17 号染色体原位杂交。
将针对人第 1 号、第 15 号和第 17 号染色体的 α 卫星探针通过切口平移法分别用生物素-11-dUTP、
ChromaTide Texas Red-12-dUTP 和
ChromaTide Oregon Green 488-5-dUTP 标记。在所有三种探针同时杂交后，用 HRP-链霉亲和素偶联物和
Alexa Fluor 546 酪酰胺检出生物素化的第 1 号染色体探针。然后通过用 1% 过氧化氢处理 30 分钟猝灭来自这个第一 TSA 检测步骤的 HRP 活性。 最后，将 Invitrogen™ Oregon Green™ 488 染料标记的第 17号染色体探针用
抗荧光素/Oregon Green 抗体、继而用 HRP 标记的山羊抗小鼠 IgG 抗体和 Invitrogen™ Alexa Fluor™ 594 酪酰胺检测。然后通过用 1% 过氧化氢处理 30 分钟猝灭来自这个第二 TSA 检测步骤的 HRP 活性。 然后将 Invitrogen™ Texas Red™染料标记的第 15 号染色体探针用
兔抗 Texas Red 抗体、继而用 HRP 标记山羊抗兔 IgG 抗体和 Invitrogen™ Alexa Fluor™ 488 酪酰胺检测。
用 Hoechst 33258 复染后，使用适合于 DAPI、FITC、TRITC 和 Texas Red 染料的滤光片采集图像。 | 通过酪酰胺信号放大检测的荧光原位杂交。
染色体展开物从培养的成纤维细胞系 MRC- 5 制备，并用第 17 号染色体特异的生物素化 α卫星探针杂交。在
ChromaTide 生物素-11-dUTP存在下，通过切口平移法生成探针。为了通过 TSA 检测，用 HRP 链霉亲和素和 Alexa Fluor 488 酪酰胺（左小图）或用 HRP–链霉亲和素和 Invitrogen™ Alexa Fluor™ 546 酪酰胺（右小图）标记杂交的染色体展开物。用
DAPI 复染后，使用适合于 DAPI、FITC 或 TRITC 的滤光片获得图像。
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相关资源 | |
Molecular Probes 手册
| 相关技术
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