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ProLong 抗淬灭封片剂和试剂 |
使用我们精选的 ProLong 抗淬灭封片剂和 ProLong Live 抗淬灭试剂，提升您的荧光显微镜成像质量。这些产品旨在抑制光漂白并保持荧光信号强度，为您的样品提供卓越的保护。用于固定细胞的 ProLong 抗淬灭封片剂可为固定样品提供可靠的长期保护，有助于确保标记靶分子的荧光信号在长期储存和分析中保持稳定。ProLong Live 抗淬灭试剂可满足活细胞成像需求，在长时间成像过程中保持细胞活力和荧光信号。探索ProLong 抗淬灭封片剂系列，总有一款满足您多样的荧光成像需求。
产品亮点
ProLong 固定样品抗淬灭封片剂
- 即使长时间储存，也能抑制全光谱范围内的光漂白
- 全光谱范围内背景低
- 硬质封片剂
- 含或不含 DAPI 可选
- 即用型
- 可根据您的需求选择折射率：ProLong Glass为 1.52，ProLong RapidSet（1 小时后）为 1.49，ProLong Diamond 和 ProLong Gold为 1.47
ProLong 活细胞抗淬灭试剂
- 抑制活细胞的光漂白
- 兼容全光谱范围内的荧光染料和荧光蛋白
- 延长活细胞成像时间
- 对细胞活力和增殖的影响极小
- 即用型 100X 配方
- 折射率：1.3
ProLong 抗淬灭剂选择指南
ProLong 抗淬灭封片剂是即用型硬质封片剂，用于固定动物细胞和组织的长时间成像。
| 新品！ProLong RapidSet antifade mountant | ProLong Glass | ProLong Diamond | ProLong Gold | ||||
| ProLong Glass 抗淬灭封片剂 | ProLong Glass 抗淬灭封片剂，含NucBlue核复染剂 | ProLong Diamond 抗淬灭封片剂 | ProLong Diamond 抗淬灭封片剂，含DAPI核复染剂 | ProLong Gold 抗淬灭封片剂 | ProLong Gold 抗淬灭封片剂，含DAPI核复染剂 | ||
| 固化时间 | 1 小时 | 18–60 小时 (取决于样品厚度) | 24 小时s | 24 小时s | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 样品厚度 | 厚至80 µm | 厚至150 µm | 厚至10 µm | 厚至10 µm | |||
| 折射率（固化后） | 1.49 (固化1h) 1.52 (固化24h) | 1.52 (固化24h) | 1.47 (固化24h) | 1.47 (固化24h) | |||
| 样品储存温度 | 室温 4°C ≤-20°C (最佳) | 室温 4°C ≤-20°C (最佳) | 室温 4°C ≤-20°C (最佳) | 室温 4°C ≤-20°C (最佳) | |||
| 最佳显微镜物镜* | 油镜 | 油镜 | 甘油物镜 | 甘油物镜 | |||
| 兼容荧光基团 | 大多数染料和荧光蛋白 | 大多数染料和荧光蛋白 | 大多数染料和荧光蛋白 | Alexa Fluor 染料 | |||
| 试剂存储温度 | 2-8°C | 2-8°C | 2-8°C | 室温 | |||
| 规格 | 50 张玻片 5 x 50 张玻片 | 5 x 2 mL 2 mL 10 mL | 5 x 2 mL 2 mL 10 mL | 5 x 2 mL 2 mL 10 mL | |||
| 使用指南 | 使用指南：ProLong Glass 抗淬灭封片剂 | 使用指南：ProLong Gold和Diamond 抗淬灭封片剂 | |||||
*上表封片剂与所有物镜类型兼容
ProLong 抗淬灭封片剂在固定样品中的性能
使用 ProLong RapidSet 封片剂，在更短时间内获得出色的图像分辨率
在显微镜下，材料的折射率 (RI) 决定了光线进入该材料时的弯曲或折射程度。样品和封片剂之间 RI 的显著差异会导致光学畸变。为了最大限度地减少这些畸变，必须减小样品和封片剂之间的 RI 差异。
ProLong RapidSet 抗淬灭封片剂是一种新型硬性封片剂，能够在 1 小时内完全固化，同时接近 ProLong Glass 的折射率和可保存性。与其他需要数小时至数天才能硬化的封片剂不同，ProLong RapidSet 封片剂可在 1 小时内达到 1.49 的 RI（图 1、2），从而可以在当天完成成像，且不会影响图像质量。
图 1. ProLong RapidSet 封片剂在 1 小时内即可达到 1.49 的折射率 (RI)，比其他需要数天才能硬化的封片剂更快。我们使用配备封闭棱镜的阿贝折射仪 (589 nm)，在 4 天内模拟盖玻片上的硬化过程，比较了 ProLong RapidSet 抗荧光淬灭封片剂和其他封片剂的折射率 (RI) 与时间的关系。大多数封片剂需要数天时间才能通过水分蒸发硬化，而 ProLong RapidSet 封片剂则可在 1 小时内硬化，初始 RI 接近 1.49，高于大多数其他硬化封片剂。如果样品中的水分完全蒸发，其 RI 可达到 1.52，非常适合与玻璃盖玻片配合进行高分辨率荧光成像。
图 2. 快速硬化可在极短时间内提升图像分辨率。将冻存大鼠脑切片（100 µm 厚）用 NucBlue 固定细胞 ReadyProbes 试剂 (DAPI) 染色，并封片于 A) ProLong Glass 抗淬灭封片剂中，使用方案 C 过夜硬化；B) ProLong Glass 抗淬灭封片剂，封片后3小时成像；C) ProLong RapidSet抗淬灭封片剂，封片后3小时成像。折射率 (RI) 值由折射仪测量值近似得出，并四舍五入到小数点后两位。(A) ProLong Glass 抗淬灭封片剂 (RI = 1.52) 完全硬化后可在厚样品中实现高分辨率成像，完全硬化需要 16 至 72 小时。 (B) 使用 ProLong Glass 抗淬灭封片剂（初始 RI = 1.38）对样品进行成像，硬化三小时后，由于 RI 不匹配，30 µm以上的荧光强度降低。(C) 使用 ProLong RapidSet 抗淬灭封片剂（RI ~1.49）1 小时即可硬化，RI 匹配度更高。使用 ProLong RapidSet 封片剂三小时后对样品进行成像，30 µm以上的分辨率与 (B) 相比有所提高，但由于 RI 略有不匹配（1.49 vs. 1.52），分辨率不如 (A)。样品成像采用配备 Plan-Apochromat 63×/1.4 NA 油浸物镜的 Zeiss™ LSM 980 共聚焦显微镜。Z 轴投影由 Zeiss™ Zen 软件生成。
提高光学清晰度，获得清晰明亮的图像
将封片剂的折射率 (RI) 与成像系统匹配对于在显微镜下实现高分辨率成像至关重要。通过使封片剂的折射率与成像系统的折射率一致，光线可以从样品穿过封片剂进入成像系统，而不会发生明显的折射或反射。这种折射率的匹配可以最大限度地减少光畸变，并保持所捕获图像的完整性，有助于确保任何折射率不匹配都不会影响最终图像质量。使用 ProLong RapidSet 或 ProLong Glass 试剂（其折射率值约为 1.52）等产品进行有效的 RI 匹配，有助于实现高分辨率成像，从而清晰、细致、准确地呈现样品内部结构（图 3）。
图 3. 封片剂的折射率 (RI) 与成像系统匹配对于实现高分辨率成像至关重要。将自由漂浮的冻存大鼠脑切片（100 µm 厚）用 NucBlue 固定细胞 ReadyProbes 试剂 (DAPI) 染色，并分别封片于 (A) ProLong Glass 抗淬灭封片剂（使用方案 C 过夜硬化）、(B) ProLong RapidSet 抗淬灭封片剂（封片剂在封片剂上 3 小时后成像）和 (C) VectaShield® Vibrance® 抗淬灭封片剂（封片剂）中（硬化四天）。折射率 (RI) 值由折射仪测量值近似得出，并四舍五入到小数点后两位。(A) ProLong Glass 抗淬灭封片剂（RI = 1.52）完全硬化后可在厚样品中呈现高分辨率成像，通过水分蒸发需要 16 至 72 小时。 (B) ProLong RapidSet 封片剂（折射率约 1.49）在 1 小时内即可硬化，提供更佳的折射率匹配度。使用 RapidSet 封片剂仅三小时后成像的样品，与 (B) 相比，30 微米以上的分辨率有所提高，但由于折射率略有不匹配（1.49 vs. 1.52），分辨率不如 (A)。(C) 使用 VectaShield® Vibrance® 抗淬灭封片剂（折射率 = 1.46）进行长时间硬化后的样品，由于折射率不匹配，30 微米以上的荧光强度有所降低。样品成像采用配备 Plan-Apochromat 63×/1.4 NA 油浸物镜的 Zeiss™ LSM 980 共聚焦显微镜。Z 轴投影由 Zeiss™ Zen 软件生成。
最大程度减少光漂白，提高荧光强度
在荧光显微镜成像中，光漂白是一种常见现象，即荧光分子在光照下会失去荧光。这会导致信号强度降低，并影响成像质量。使用抗淬灭封片剂（例如 ProLong RapidSet、ProLong Glass 和 ProLong Diamond 试剂）可以最大程度减少光漂白。这些抗淬灭封片剂可以稳定荧光团，并在长时间成像过程中保持信号强度（图 4、5）。通过降低光漂白的影响，这些封片剂有助于确保更清晰、更可靠的成像结果。
图 4. 抗淬灭保护可提高荧光成像过程中的光稳定性。培养细胞经荧光素 (FITC) 鬼笔环肽标记探针染色后，封片于ProLong Glass、ProLong Diamond 和 ProLong Rapidset 封片剂中，在配备 20 倍空气盖玻片校正物镜的 EVOS M7000 成像系统上，在曝光匹配的光照设置下，通过持续光照一分钟进行光漂白。数据绘制为荧光保留百分比（tn 处的荧光/t0 处的荧光）。
图 5. 60 秒延时成像展现了 ProLong 抗淬灭封片剂增强的抗光漂白能力。使用配备 20 倍空气盖玻片校正物镜的 EVOS M7000 成像系统，对 ProLong Glass、ProLong Diamond 和 ProLong RapidSet抗淬灭封片剂封片的荧光素 (FITC) 鬼笔环肽标记探针染色的细胞进行 60 秒的持续照明成像。以 12 秒为间隔拍摄图像进行比较。
全光谱信号保护
ProLong 抗淬灭封片剂不仅能降低荧光信号初始猝灭，还能在可见光和近红外光谱范围内提供低背景和抗光漂白保护（表 1，图 6）。它们还能为 FITC 等传统染料和 GFP 等荧光蛋白提供额外保护。
表 1. 全光谱抗光漂白性能。
| 荧光基团 | 激发/发射 (nm) | 抗淬灭性能 | ||
|---|---|---|---|---|
| ProLong RapidSet | ProLong Glass | ProLong Diamond | ||
| Alexa Fluor 405 | 400/424 | ++ | + | +++ |
| Alexa Fluor Plus 405 | 405/450 | ++ | + | +++ |
| DAPI | 345/455 | +++ | +++ | +++ |
| Hoechst 33342 | 350/461 | ++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 420 | 420/500 | ++ | ++ | ++ |
| emGFP | 488/510 | +++ | +++ | +++ |
| Fluorescein | 494/518 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 488 | 495/519 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 488 | 495/519 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 514 | 518/543 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 555 | 555/565 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 555 | 555/565 | +++ | +++ | +++ |
| Cy3 | 550/570 | +++ | ++ | ++ |
| Alexa Fluor 546 | 556/575 | +++ | ++ | ++ |
| Tetramethylrhodamine | 555/580 | +++ | ++ | +++ |
| TagRFP | 555/584 | +++ | +++ | ++ |
| Alexa Fluor 568 | 578/603 | +++ | +++ | +++ |
| mCherry | 575/610 | +++ | +++ | +++ |
| Texas Red | 595/615 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 594 | 590/617 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 594 | 590/617 | +++ | ++ | +++ |
| TO-PRO-3 | 642/661 | ++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 647 | 652/668 | ++ | ++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 647 | 652/668 | ++ | ++ | +++ |
| Cy5 | 650/670 | ++ | +++ | +++ |
| SYTOX Deep Red | 660/682 | ++ | +++ | ++ |
| Alexa Fluor 700 | 702/723 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 750 | 760/788 | +++ | ++ | + |
| 注释：+++ = 最佳性能，++ = 更好性能，+ = 良好性能。*使用包括荧光保留、荧光信号与背景以及标记/样品外观在内的指标来评估荧光团性能。 | ||||
图 6. 专为保护全光谱荧光染料和荧光蛋白而设计。将用Alexa Fluor 488 Phalloidin 标记探针（绿色）染色的细胞、用Alexa Fluor 647 山羊抗鼠二抗（红色）检测的小鼠抗微管蛋白一抗以及 NucBlue 固定细胞 ReadyProbes 试剂（蓝色，DAPI）进行封片，并使用ProLong Glass 抗淬灭封片剂、ProLong Diamond 抗淬灭封片剂和ProLong RapidSet 抗淬灭封片剂以及 VectaShield® Vibrance® 和 HardSet™ 抗淬灭封片剂进行封片，并在配备 20 倍空气盖玻片校正物镜的EVOS M7000 成像系统上使用等效曝光设置进行成像。ProLong 抗淬灭封片剂可与多种荧光蛋白和染料化学成分兼容，以减少光漂白并防止成像前发生荧光猝灭。请注意，由于不兼容，Alexa Fluor 染料 647 在 VectaShield® HardSet™ 抗淬灭封片剂中会失去荧光。
ProLong Glass 封片剂卓越的纵向分辨率
ProLong Glass 抗淬灭封片剂的折射率约为 1.52，与盖玻片、油浸物镜和油浸物镜光学元件的折射率相似。这种卓越的光学清晰度意味着，与折射率为 1.47 的封片剂相比，ProLong Glass 试剂的纵向分辨率可提高高达 75%，可成像焦深可提高 3-4 倍（图 7），从而能够为单层细胞、组织切片或 3D 细胞培养物生成清晰的图像，厚度/焦深可达 150 μm（图 8）。
图 7. ProLong Glass 抗淬灭封片剂（折射率为 1.52）比折射率为 1.47 的封片剂具有更高的纵向分辨率。170 μm 微球在两种封片剂中的横向和轴向分辨率，绘制为在不同焦深下采集图像的点扩展函数 (PSF)。（误差线：标准差，n ≥ 3）。
图 8. 使用 ProLong Glass 抗淬灭封片剂封片的 A549 细胞球的轴向和横向共聚焦图像。在 Nunclon Sphera 微孔板中以 100 个细胞/孔培养的 A549 细胞球，用NucBlue Live ReadyProbes 试剂、MitoTracker Orange 和 CellROX Deep Red 试剂标记，在 37°C 下进行 1 小时的氧化应激检测。随后，用 4% PFA 固定细胞，将其转移到 1.5 号盖玻片上，并封片于 ProLong Glass 中。将样品暴露在空气中过夜，然后用 100% 甘油将盖玻片封片到载玻片上。使用运行 Zen 软件的蔡司 LSM710 共聚焦显微镜进行图像采集和分析。
ProLong live 抗淬灭试剂为 100 X母液，可用于活细胞和组织。
| ProLong Live 抗淬灭试剂 | |
| 成像类型 | 活细胞 |
| 最佳显微镜物镜* | 甘油物镜 水或空气物镜 |
| 折射率 | 1.3 |
| 孵育时间 | 15 min to 2 hours (推荐2h) |
| 兼容荧光基团 | 任何染料和荧光蛋白 |
| 试剂存储温度 | 2–8°C (最长30天) ≤–20°C (最长6个月) |
| 规格 | 5 x 1 mL 1 mL |
| 使用指南 | 使用指南：ProLong Live 抗淬灭试剂 |
*该抗淬灭试剂与所有物镜类型兼容
ProLong 抗淬灭试剂在活细胞成像中的性能
最大程度减少光漂白，增强信号强度
ProLong Live 抗淬灭试剂通过减少活细胞成像过程中导致荧光损失的光化学反应，帮助防止光漂白。ProLong Live 试剂含有可代谢自由基单线态氧的酶，从而减少染料分子降解和光漂白。通过稳定活细胞中的荧光染料或蛋白质，ProLong Live 抗淬灭试剂有助于长时间保存荧光信号（图 9）。这使得研究人员能够进行更长时间、更清晰的活细胞成像实验，并获得高质量的图像。
图 9. 使用 ProLong Live 抗淬灭试剂进行光漂白保护。HeLa 细胞用 CellLight 线粒体-GFP（绿色）转导 24 小时，然后用 NucBlue Live ReadyProbes 试剂 （Hoechst 33342 染料，蓝色）标记 15 分钟。将 ProLong Live 抗淬灭试剂添加到一份样品中，孵育 2 小时。与仅用完全培养基孵育的对照样品（下图）相比，用 ProLong Live 抗淬灭试剂孵育的样品（上图）在所有时间点均保留了更佳的信号。
在整个光谱范围内保留信号
ProLong Live 抗淬灭试剂兼容多种荧光，适用于各种实验设置和应用。此外，ProLong Live 试剂可以保存荧光蛋白、功能性探针（如 MitoTracker 染料）和复染剂（如 Hoechst 33342）的信号，以扩展成像方案并实现更准确的测量（如上图 9、图 10 所示）。
图 10. 使用多种荧光团实现有效的光漂白保护。表达荧光蛋白（CellLight MitoGFP 和 MitoRFP）或用荧光染料（MitoTracker Green、Red、Deep Red 或 Hoechst 33342 染料）处理的 HeLa 或 U2OS 细胞，经 ProLong Live 试剂处理后，在高内涵分析仪上以共聚焦模式进行扫描。光漂白保护程度以重复曝光后剩余的初始荧光强度百分比表示。每张图均标明 EC50（半峰荧光信号），ProLong Live 试剂提供的整体信号保护（与未处理样品相比）是根据处理和未处理样品达到 EC50 值的扫描次数计算得出的。添加 ProLong Live 试剂后，(A) CellLight MitoGFP (EmGFP) 捕获次数增加 50%；(B) CellLight MitoRFP (TagRFP) 捕获次数增加 100%； (C) 使用 MitoTracker Green 时捕获量增加 120%；(D) 使用 MitoTracker Red 时捕获量增加 67%；(E) 使用 MitoTracker Deep Red 时捕获量增加 85%；(F) 使用 Hoechst 33342 染料时捕获量增加（未计算数量）。
维持细胞活力和增殖
ProLong Live 抗淬灭试剂配方温和，不影响活细胞，可在不影响细胞活力或增殖的情况下进行长时间成像（图 11）。这一特性对于需要维持细胞健康和功能的长期成像实验至关重要。
图 11. ProLong Live 试剂处理不影响细胞活力和增殖。将 HeLa 细胞以 1,000 个细胞/孔的浓度接种于 96 孔板中，并用工作浓度的 ProLong Live 抗淬灭试剂处理指定时间。使用 (A) LIVE/DEAD Red 染料、(B) CyQUANT Direct 试剂和 (C) PrestoBlue 试剂检测细胞活力。使用 (D) Click-iT Plus EdU 试剂检测细胞增殖。误差线 = 标准差。
ProLong 抗淬灭封片剂是即用型硬质封片剂，用于固定动物细胞和组织的长时间成像。
| 新品！ProLong RapidSet antifade mountant | ProLong Glass | ProLong Diamond | ProLong Gold | ||||
| ProLong Glass 抗淬灭封片剂 | ProLong Glass 抗淬灭封片剂，含NucBlue核复染剂 | ProLong Diamond 抗淬灭封片剂 | ProLong Diamond 抗淬灭封片剂，含DAPI核复染剂 | ProLong Gold 抗淬灭封片剂 | ProLong Gold 抗淬灭封片剂，含DAPI核复染剂 | ||
| 固化时间 | 1 小时 | 18–60 小时 (取决于样品厚度) | 24 小时s | 24 小时s | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 样品厚度 | 厚至80 µm | 厚至150 µm | 厚至10 µm | 厚至10 µm | |||
| 折射率（固化后） | 1.49 (固化1h) 1.52 (固化24h) | 1.52 (固化24h) | 1.47 (固化24h) | 1.47 (固化24h) | |||
| 样品储存温度 | 室温 4°C ≤-20°C (最佳) | 室温 4°C ≤-20°C (最佳) | 室温 4°C ≤-20°C (最佳) | 室温 4°C ≤-20°C (最佳) | |||
| 最佳显微镜物镜* | 油镜 | 油镜 | 甘油物镜 | 甘油物镜 | |||
| 兼容荧光基团 | 大多数染料和荧光蛋白 | 大多数染料和荧光蛋白 | 大多数染料和荧光蛋白 | Alexa Fluor 染料 | |||
| 试剂存储温度 | 2-8°C | 2-8°C | 2-8°C | 室温 | |||
| 规格 | 50 张玻片 5 x 50 张玻片 | 5 x 2 mL 2 mL 10 mL | 5 x 2 mL 2 mL 10 mL | 5 x 2 mL 2 mL 10 mL | |||
| 使用指南 | 使用指南：ProLong Glass 抗淬灭封片剂 | 使用指南：ProLong Gold和Diamond 抗淬灭封片剂 | |||||
*上表封片剂与所有物镜类型兼容
ProLong 抗淬灭封片剂在固定样品中的性能
使用 ProLong RapidSet 封片剂，在更短时间内获得出色的图像分辨率
在显微镜下，材料的折射率 (RI) 决定了光线进入该材料时的弯曲或折射程度。样品和封片剂之间 RI 的显著差异会导致光学畸变。为了最大限度地减少这些畸变，必须减小样品和封片剂之间的 RI 差异。
ProLong RapidSet 抗淬灭封片剂是一种新型硬性封片剂，能够在 1 小时内完全固化，同时接近 ProLong Glass 的折射率和可保存性。与其他需要数小时至数天才能硬化的封片剂不同，ProLong RapidSet 封片剂可在 1 小时内达到 1.49 的 RI（图 1、2），从而可以在当天完成成像，且不会影响图像质量。
图 1. ProLong RapidSet 封片剂在 1 小时内即可达到 1.49 的折射率 (RI)，比其他需要数天才能硬化的封片剂更快。我们使用配备封闭棱镜的阿贝折射仪 (589 nm)，在 4 天内模拟盖玻片上的硬化过程，比较了 ProLong RapidSet 抗荧光淬灭封片剂和其他封片剂的折射率 (RI) 与时间的关系。大多数封片剂需要数天时间才能通过水分蒸发硬化，而 ProLong RapidSet 封片剂则可在 1 小时内硬化，初始 RI 接近 1.49，高于大多数其他硬化封片剂。如果样品中的水分完全蒸发，其 RI 可达到 1.52，非常适合与玻璃盖玻片配合进行高分辨率荧光成像。
图 2. 快速硬化可在极短时间内提升图像分辨率。将冻存大鼠脑切片（100 µm 厚）用 NucBlue 固定细胞 ReadyProbes 试剂 (DAPI) 染色，并封片于 A) ProLong Glass 抗淬灭封片剂中，使用方案 C 过夜硬化；B) ProLong Glass 抗淬灭封片剂，封片后3小时成像；C) ProLong RapidSet抗淬灭封片剂，封片后3小时成像。折射率 (RI) 值由折射仪测量值近似得出，并四舍五入到小数点后两位。(A) ProLong Glass 抗淬灭封片剂 (RI = 1.52) 完全硬化后可在厚样品中实现高分辨率成像，完全硬化需要 16 至 72 小时。 (B) 使用 ProLong Glass 抗淬灭封片剂（初始 RI = 1.38）对样品进行成像，硬化三小时后，由于 RI 不匹配，30 µm以上的荧光强度降低。(C) 使用 ProLong RapidSet 抗淬灭封片剂（RI ~1.49）1 小时即可硬化，RI 匹配度更高。使用 ProLong RapidSet 封片剂三小时后对样品进行成像，30 µm以上的分辨率与 (B) 相比有所提高，但由于 RI 略有不匹配（1.49 vs. 1.52），分辨率不如 (A)。样品成像采用配备 Plan-Apochromat 63×/1.4 NA 油浸物镜的 Zeiss™ LSM 980 共聚焦显微镜。Z 轴投影由 Zeiss™ Zen 软件生成。
提高光学清晰度，获得清晰明亮的图像
将封片剂的折射率 (RI) 与成像系统匹配对于在显微镜下实现高分辨率成像至关重要。通过使封片剂的折射率与成像系统的折射率一致，光线可以从样品穿过封片剂进入成像系统，而不会发生明显的折射或反射。这种折射率的匹配可以最大限度地减少光畸变，并保持所捕获图像的完整性，有助于确保任何折射率不匹配都不会影响最终图像质量。使用 ProLong RapidSet 或 ProLong Glass 试剂（其折射率值约为 1.52）等产品进行有效的 RI 匹配，有助于实现高分辨率成像，从而清晰、细致、准确地呈现样品内部结构（图 3）。
图 3. 封片剂的折射率 (RI) 与成像系统匹配对于实现高分辨率成像至关重要。将自由漂浮的冻存大鼠脑切片（100 µm 厚）用 NucBlue 固定细胞 ReadyProbes 试剂 (DAPI) 染色，并分别封片于 (A) ProLong Glass 抗淬灭封片剂（使用方案 C 过夜硬化）、(B) ProLong RapidSet 抗淬灭封片剂（封片剂在封片剂上 3 小时后成像）和 (C) VectaShield® Vibrance® 抗淬灭封片剂（封片剂）中（硬化四天）。折射率 (RI) 值由折射仪测量值近似得出，并四舍五入到小数点后两位。(A) ProLong Glass 抗淬灭封片剂（RI = 1.52）完全硬化后可在厚样品中呈现高分辨率成像，通过水分蒸发需要 16 至 72 小时。 (B) ProLong RapidSet 封片剂（折射率约 1.49）在 1 小时内即可硬化，提供更佳的折射率匹配度。使用 RapidSet 封片剂仅三小时后成像的样品，与 (B) 相比，30 微米以上的分辨率有所提高，但由于折射率略有不匹配（1.49 vs. 1.52），分辨率不如 (A)。(C) 使用 VectaShield® Vibrance® 抗淬灭封片剂（折射率 = 1.46）进行长时间硬化后的样品，由于折射率不匹配，30 微米以上的荧光强度有所降低。样品成像采用配备 Plan-Apochromat 63×/1.4 NA 油浸物镜的 Zeiss™ LSM 980 共聚焦显微镜。Z 轴投影由 Zeiss™ Zen 软件生成。
最大程度减少光漂白，提高荧光强度
在荧光显微镜成像中，光漂白是一种常见现象，即荧光分子在光照下会失去荧光。这会导致信号强度降低，并影响成像质量。使用抗淬灭封片剂（例如 ProLong RapidSet、ProLong Glass 和 ProLong Diamond 试剂）可以最大程度减少光漂白。这些抗淬灭封片剂可以稳定荧光团，并在长时间成像过程中保持信号强度（图 4、5）。通过降低光漂白的影响，这些封片剂有助于确保更清晰、更可靠的成像结果。
图 4. 抗淬灭保护可提高荧光成像过程中的光稳定性。培养细胞经荧光素 (FITC) 鬼笔环肽标记探针染色后，封片于ProLong Glass、ProLong Diamond 和 ProLong Rapidset 封片剂中，在配备 20 倍空气盖玻片校正物镜的 EVOS M7000 成像系统上，在曝光匹配的光照设置下，通过持续光照一分钟进行光漂白。数据绘制为荧光保留百分比（tn 处的荧光/t0 处的荧光）。
图 5. 60 秒延时成像展现了 ProLong 抗淬灭封片剂增强的抗光漂白能力。使用配备 20 倍空气盖玻片校正物镜的 EVOS M7000 成像系统，对 ProLong Glass、ProLong Diamond 和 ProLong RapidSet抗淬灭封片剂封片的荧光素 (FITC) 鬼笔环肽标记探针染色的细胞进行 60 秒的持续照明成像。以 12 秒为间隔拍摄图像进行比较。
全光谱信号保护
ProLong 抗淬灭封片剂不仅能降低荧光信号初始猝灭，还能在可见光和近红外光谱范围内提供低背景和抗光漂白保护（表 1，图 6）。它们还能为 FITC 等传统染料和 GFP 等荧光蛋白提供额外保护。
表 1. 全光谱抗光漂白性能。
| 荧光基团 | 激发/发射 (nm) | 抗淬灭性能 | ||
|---|---|---|---|---|
| ProLong RapidSet | ProLong Glass | ProLong Diamond | ||
| Alexa Fluor 405 | 400/424 | ++ | + | +++ |
| Alexa Fluor Plus 405 | 405/450 | ++ | + | +++ |
| DAPI | 345/455 | +++ | +++ | +++ |
| Hoechst 33342 | 350/461 | ++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 420 | 420/500 | ++ | ++ | ++ |
| emGFP | 488/510 | +++ | +++ | +++ |
| Fluorescein | 494/518 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 488 | 495/519 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 488 | 495/519 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 514 | 518/543 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 555 | 555/565 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 555 | 555/565 | +++ | +++ | +++ |
| Cy3 | 550/570 | +++ | ++ | ++ |
| Alexa Fluor 546 | 556/575 | +++ | ++ | ++ |
| Tetramethylrhodamine | 555/580 | +++ | ++ | +++ |
| TagRFP | 555/584 | +++ | +++ | ++ |
| Alexa Fluor 568 | 578/603 | +++ | +++ | +++ |
| mCherry | 575/610 | +++ | +++ | +++ |
| Texas Red | 595/615 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 594 | 590/617 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 594 | 590/617 | +++ | ++ | +++ |
| TO-PRO-3 | 642/661 | ++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor 647 | 652/668 | ++ | ++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 647 | 652/668 | ++ | ++ | +++ |
| Cy5 | 650/670 | ++ | +++ | +++ |
| SYTOX Deep Red | 660/682 | ++ | +++ | ++ |
| Alexa Fluor 700 | 702/723 | +++ | +++ | +++ |
| Alexa Fluor Plus 750 | 760/788 | +++ | ++ | + |
| 注释：+++ = 最佳性能，++ = 更好性能，+ = 良好性能。*使用包括荧光保留、荧光信号与背景以及标记/样品外观在内的指标来评估荧光团性能。 | ||||
图 6. 专为保护全光谱荧光染料和荧光蛋白而设计。将用Alexa Fluor 488 Phalloidin 标记探针（绿色）染色的细胞、用Alexa Fluor 647 山羊抗鼠二抗（红色）检测的小鼠抗微管蛋白一抗以及 NucBlue 固定细胞 ReadyProbes 试剂（蓝色，DAPI）进行封片，并使用ProLong Glass 抗淬灭封片剂、ProLong Diamond 抗淬灭封片剂和ProLong RapidSet 抗淬灭封片剂以及 VectaShield® Vibrance® 和 HardSet™ 抗淬灭封片剂进行封片，并在配备 20 倍空气盖玻片校正物镜的EVOS M7000 成像系统上使用等效曝光设置进行成像。ProLong 抗淬灭封片剂可与多种荧光蛋白和染料化学成分兼容，以减少光漂白并防止成像前发生荧光猝灭。请注意，由于不兼容，Alexa Fluor 染料 647 在 VectaShield® HardSet™ 抗淬灭封片剂中会失去荧光。
ProLong Glass 封片剂卓越的纵向分辨率
ProLong Glass 抗淬灭封片剂的折射率约为 1.52，与盖玻片、油浸物镜和油浸物镜光学元件的折射率相似。这种卓越的光学清晰度意味着，与折射率为 1.47 的封片剂相比，ProLong Glass 试剂的纵向分辨率可提高高达 75%，可成像焦深可提高 3-4 倍（图 7），从而能够为单层细胞、组织切片或 3D 细胞培养物生成清晰的图像，厚度/焦深可达 150 μm（图 8）。
图 7. ProLong Glass 抗淬灭封片剂（折射率为 1.52）比折射率为 1.47 的封片剂具有更高的纵向分辨率。170 μm 微球在两种封片剂中的横向和轴向分辨率，绘制为在不同焦深下采集图像的点扩展函数 (PSF)。（误差线：标准差，n ≥ 3）。
图 8. 使用 ProLong Glass 抗淬灭封片剂封片的 A549 细胞球的轴向和横向共聚焦图像。在 Nunclon Sphera 微孔板中以 100 个细胞/孔培养的 A549 细胞球，用NucBlue Live ReadyProbes 试剂、MitoTracker Orange 和 CellROX Deep Red 试剂标记，在 37°C 下进行 1 小时的氧化应激检测。随后，用 4% PFA 固定细胞，将其转移到 1.5 号盖玻片上，并封片于 ProLong Glass 中。将样品暴露在空气中过夜，然后用 100% 甘油将盖玻片封片到载玻片上。使用运行 Zen 软件的蔡司 LSM710 共聚焦显微镜进行图像采集和分析。
ProLong live 抗淬灭试剂为 100 X母液，可用于活细胞和组织。
| ProLong Live 抗淬灭试剂 | |
| 成像类型 | 活细胞 |
| 最佳显微镜物镜* | 甘油物镜 水或空气物镜 |
| 折射率 | 1.3 |
| 孵育时间 | 15 min to 2 hours (推荐2h) |
| 兼容荧光基团 | 任何染料和荧光蛋白 |
| 试剂存储温度 | 2–8°C (最长30天) ≤–20°C (最长6个月) |
| 规格 | 5 x 1 mL 1 mL |
| 使用指南 | 使用指南：ProLong Live 抗淬灭试剂 |
*该抗淬灭试剂与所有物镜类型兼容
ProLong 抗淬灭试剂在活细胞成像中的性能
最大程度减少光漂白，增强信号强度
ProLong Live 抗淬灭试剂通过减少活细胞成像过程中导致荧光损失的光化学反应，帮助防止光漂白。ProLong Live 试剂含有可代谢自由基单线态氧的酶，从而减少染料分子降解和光漂白。通过稳定活细胞中的荧光染料或蛋白质，ProLong Live 抗淬灭试剂有助于长时间保存荧光信号（图 9）。这使得研究人员能够进行更长时间、更清晰的活细胞成像实验，并获得高质量的图像。
图 9. 使用 ProLong Live 抗淬灭试剂进行光漂白保护。HeLa 细胞用 CellLight 线粒体-GFP（绿色）转导 24 小时，然后用 NucBlue Live ReadyProbes 试剂 （Hoechst 33342 染料，蓝色）标记 15 分钟。将 ProLong Live 抗淬灭试剂添加到一份样品中，孵育 2 小时。与仅用完全培养基孵育的对照样品（下图）相比，用 ProLong Live 抗淬灭试剂孵育的样品（上图）在所有时间点均保留了更佳的信号。
在整个光谱范围内保留信号
ProLong Live 抗淬灭试剂兼容多种荧光，适用于各种实验设置和应用。此外，ProLong Live 试剂可以保存荧光蛋白、功能性探针（如 MitoTracker 染料）和复染剂（如 Hoechst 33342）的信号，以扩展成像方案并实现更准确的测量（如上图 9、图 10 所示）。
图 10. 使用多种荧光团实现有效的光漂白保护。表达荧光蛋白（CellLight MitoGFP 和 MitoRFP）或用荧光染料（MitoTracker Green、Red、Deep Red 或 Hoechst 33342 染料）处理的 HeLa 或 U2OS 细胞，经 ProLong Live 试剂处理后，在高内涵分析仪上以共聚焦模式进行扫描。光漂白保护程度以重复曝光后剩余的初始荧光强度百分比表示。每张图均标明 EC50（半峰荧光信号），ProLong Live 试剂提供的整体信号保护（与未处理样品相比）是根据处理和未处理样品达到 EC50 值的扫描次数计算得出的。添加 ProLong Live 试剂后，(A) CellLight MitoGFP (EmGFP) 捕获次数增加 50%；(B) CellLight MitoRFP (TagRFP) 捕获次数增加 100%； (C) 使用 MitoTracker Green 时捕获量增加 120%；(D) 使用 MitoTracker Red 时捕获量增加 67%；(E) 使用 MitoTracker Deep Red 时捕获量增加 85%；(F) 使用 Hoechst 33342 染料时捕获量增加（未计算数量）。
维持细胞活力和增殖
ProLong Live 抗淬灭试剂配方温和，不影响活细胞，可在不影响细胞活力或增殖的情况下进行长时间成像（图 11）。这一特性对于需要维持细胞健康和功能的长期成像实验至关重要。
图 11. ProLong Live 试剂处理不影响细胞活力和增殖。将 HeLa 细胞以 1,000 个细胞/孔的浓度接种于 96 孔板中，并用工作浓度的 ProLong Live 抗淬灭试剂处理指定时间。使用 (A) LIVE/DEAD Red 染料、(B) CyQUANT Direct 试剂和 (C) PrestoBlue 试剂检测细胞活力。使用 (D) Click-iT Plus EdU 试剂检测细胞增殖。误差线 = 标准差。
订购信息
ProLong 固定细胞抗淬灭封片剂图片库
U2-OS cells mounted with ProLong RapidSet antifade mountant. U-2 OS cells labeled with NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (Blue, DAPI), Alexa Fluor 488 Phalloidin Labeling Probe (Green), CellLight Mitochondria-RFP, BacMam 2.0 (Yellow), and immunostained with beta-Tubulin Monoclonal Antibody (2 28 33) detected with Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor Plus 647 (Red) then mounted in ProLong RapidSet antifade mountant. Samples imaged with a Zeiss LSM 980 confocal microscope equipped with a Plan-Apochromat 63×/1.4 NA Oil immersion objective. Z-projections were generated using Zeiss Zen software.
U2-OS cells mounted with ProLong RapidSet antifade mountant. U-2 OS cells labeled with NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (Blue, DAPI), Alexa Fluor 488 Phalloidin Labeling Probe (Green), CellLight Mitochondria-RFP, BacMam 2.0 (Yellow), and immunostained with beta-Tubulin Monoclonal Antibody (2 28 33) detected with Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor Plus 647 (Red) then mounted in ProLong RapidSet antifade mountant. Sample was imaged on an EVOS M7000 Imaging System equipped with an Olympus 20X Objective, semi-apo, 0.5NA/2.1WD20x air objective.
U2-OS cells mounted with ProLong RapidSet antifade mountant. U-2 OS cells labeled with NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (Blue, DAPI), Alexa Fluor 488 Phalloidin Labeling Probe (Green), and CellLight Mitochondria-RFP, BacMam 2.0 (Red) then mounted in ProLong RapidSet antifade mountant. Sample was imaged on an EVOS M7000 Imaging System equipped with an Olympus 40X Objective, fluorite, 0.60NA/2.7–4.0WD, correction collar (0–2.0 mm).
Deep tissue imaging with ProLong RapidSet antifade mountant. Cryo-preserved rat brain sections (100 µm thick), stained for tubulin (red) with Mouse Anti-Beta3-Tubulin and GFAP (yellow) Rabbit Anti-GFAP. Targets were detected with Alexa Fluor Plus 594 Goat Anti-Mouse and Alexa Fluor Plus 647 Goat Anti-Rabbit dyes. Nuclei (cyan) were stained with NucBlue fixed cell ReadyProbes Reagent (DAPI). Slides were mounted with ProLong RapidSet antifade mountant and imaged 3 hours just later with a Zeiss LSM 980 confocal microscope equipped with a Plan-Apochromat 63×/1.4 NA Oil immersion objective. Z-projections were generated using Zeiss™ Zen software
FFPE human intestine imaging with ProLong RapidSet antifade mountant. FFPE human small intestine section labeled with DAPI (Blue), Vimentin Monoclonal Antibody (V9) detected with Alexa Fluor Plus 488 Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody (Green), Cytokeratin 15 Polyclonal Antibody detected with Alexa Fluor Plus 647 Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody (Red), and Alexa Fluor Plus 750 Antibody Alpha-Smooth Muscle Actin Monoclonal Antibody (1A4) (White) then mounted in ProLong RapidSet antifade mountant. The tissue section was scanned on the EVOS S1000 Spatial Imaging System at 20x magnification.
FFPE mouse brain imaging with ProLong RapidSet antifade mountant. FFPE mouse brain sagittal slice stained with DAPI (Blue), rabbit anti-GFAP primary antibody detected with Alexa Fluor Plus 488 Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody (Green), MAP2 Monoclonal Antibody (AP18) detected with Alexa Fluor Plus 647 Goat anti-Mouse IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody (Red), and Alexa Fluor Plus 750 Antibody Alpha-Smooth Muscle Actin Monoclonal Antibody (1A4) (White) then mounted in ProLong RapidSet antifade mountant. The tissue section was scanned on the EVOS S1000 Spatial Imaging System at 20x magnification.
HeLa cells mounted with Prolong Glass antifade mountant. HeLa cells expressing CellLight Mitochondria-GFP were fixed and permeabilized. Tubulin was probed with Mouse Anti-beta-3 Tubulin Antibody and Alexa Fluor 647 Goat Anti-Mouse Secondary Antibody. Actin was stained with Alexa Fluor 594 Phalloidin and nuclei labeled with NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent. Cells were mounted with ProLong Glass antifade mountant and imaged on a Zeiss LSM 710 confocal microscope using a plan- apochromat 63X/1.4 NA oil immersion objective.
Tissue section mounted with ProLong Glass antifade mountant. Rat duodenal cryo section was stained with Histone H3 primary antibody, followed by goat anti-mouse Alexa Fluor 647 secondary antibody following standard IHC protocol. The tissue sections were then stained with CellMask Orange Actin Tracking Stain at 1X concentration and Hoechst 34580 for 1 hr. The tissue section was then mounted with ProLong Glass antifade mountant. Images were taken using an EVOS M7000 imaging system.
Cryo-preserved rat tissue section mounted with ProLong Glass antifade mountant. Cryo-preserved rat brain sections (100-µm thick) were stained for tubulin (red) with Mouse Anti-Beta3-Tubulin and GFAP (yellow) Rabbit Anti-GFAP. Targets were detected with Alexa Fluor Plus 594 Goat Anti-Mouse and Alexa Fluor Plus 647 Goat Anti-Rabbit. Nuclei (cyan) were stained with DAPI. Slides were mounted with ProLong Glass antifade mountant and imaged with a Zeiss LSM 710 confocal microscope using a plan- apochromat 63X/1.4 NA oil immersion objective.
Induced pluripotent stem cells (iPSCs) mounted with ProLong Diamond antifade mountant. iPSCs were cultured on a mouse embryonic feeder layer stained using Alexa Fluor dye-conjugated, live-cell qualified (sterile-filtered, bioburden tested, endotoxin-free) antibodies for fibroblast marker CD44 (green) and PSC marker TRA-1-60. Imaging was performed after fixing the cells and applying ProLong Diamond antifade mountant. Images were acquired on an EVOS FL Imaging System.
Neuronal stem cell (NSCs) mounted with ProLong Diamond antifade mountant. NSCs were generated from an iPSC line using Gibco PSC Neural Induction Medium. Cells were cultured on a Geltrex coated plate stained for the following NSC markers using the Human Neural Stem Cell Immunocytochemistry Kit: Nestin (green) and SOX2 (red) with DAPI (blue) nuclear DNA counterstaining. Images were acquired on an EVOS FL Imaging System.
HeLa cells mounted with ProLong Diamond antifade mountant. HeLa cells were fixed, permeabilized and blocked with BlockAid, stained with ActinGreen 488 Ready Probes Reagent, NucBlue Live ReadyProbes Reagent, and AlexaFluor 594 Goat Anti-Mouse IgG (H+L) Antibody against ATP Synthase, and mounted using ProLong Diamond mountant.
Neonatal human dermal fibroblasts (HDFn) cells mounted using ProLong Gold antifade mountant. HDFn cells were grown on coverslips, fixed with 4% formaldehyde, and permeabilized with 0.2% Triton X-100. Tubulin was detected with anti-tubulin-a (bovine) antibody (mouse IgG1, monoclonal 236-10501) and visualized using Alexa Fluor 594 goat anti-mouse IgG. Actin filaments were labeled with Alexa Fluor 488 phalloidin, and nuclei were stained with Hoechst 33342. Coverslips were mounted on slides using ProLong Gold antifade reagent. The multiple-exposure image was acquired on a Zeiss LSM 710 confocal microscope at 63x and 16-slice Z-stack maximum intensity projection.
Neonatal human dermal fibroblasts (HDFn) cells mounted with ProLong Gold antifade mountant. HDFn cells were fixed, permeabilized, and blocked using the Image-iTFixation/Permeabilization Kit. Golgi were labeled with an anti- golgin 97 antibody followed by detection with an Alexa Fluor 488 secondary. Cells were also stained with Alexa Fluor 594 phalloidin to label actin and NucBlue Fixed to label nuclei. Finally, cells were mounted in ProLong Gold antifade reagent.
BPAE cells mounted using ProLong Gold antifade mountant. BPAE cells were fixed, permeabilized, and blocked using the Image-iT Fixation/Permeabilization Kit. Mitochondria were labeled with an anti-CVIP antibody followed by detection with an Alexa Fluor 488 secondary. Cells were also stained with Alexa Fluor 594 phalloidin to label actin and NucBlue Fixed to label nuclei. Finally, cells were mounted in ProLong Gold antifade reagent.
ProLong 活细胞抗淬灭试剂图片库
U2OS cells mounted with ProLong Live antifade reagent. U20S cells were transduced with CellLight Talin-GFP (green) and CellLight Golgi-RFP (orange) for 24 hours then labeled with MitoTracker Deep Red (purple) and NucBlue Live ReadyProbes Reagent (Hoechst 33342) (blue) for 15 minutes. For photobleach protection, the cells were incubated with ProLong Live antifade reagent for 90 minutes before imaging.
HeLa Cells mounted with ProLong Live antifade reagent. HeLa cells were transduced with CellLight Mitochondria-RFP (red) and CellLight Talin-GFP (green) for 24 hours then labeled with NucBlue Live ReadyProbes Reagent (Hoechst 33342) (blue) for 15 minutes. To protect cells from photobleaching, cells were incubated with ProLong Live antifade reagent for 90 minutes before imaging on EVOS Cell Imaging System.
HeLa cells mounted with ProLong Live antifade reagent. HeLa cells were transduced with CellLight Talin-GFP (green) for 24 hours then labeled with MitoTracker Deep Red (red) and NucBlue Live ReadyProbes Reagent (Hoechst 33342) (blue) for 15 minutes. For photobleach protection, the cells were incubated with ProLong Live antifade reagent for 90 minutes before imaging on EVOS Cell Imaging System.
资源
文献
BioProbes 73 期刊文章： ProLong Live 抗淬灭试剂：活细胞成像实验中的光漂白防护
BioProbes 72 期刊文章： 适用于固定细胞成像的ProLong Diamond和SlowFade Diamond抗淬灭封片剂
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用于固定细胞的ProLong抗淬灭封片剂可以抑制发生光漂白，保护荧光标记靶标分子的信号，以便进行样本长期储存和分析。该试剂会在12–48小时内（取决于样品厚度）固化，并形成折射率为1.47–1.52的半硬质凝胶。而固化封片后的样品，在适当储存条件下可以保存数月。
用于固定细胞的ProLong 抗淬灭封片具有以下几大优点：
- 可抑制光谱范围内的光漂白，即使在经过长期保存后
- 在光谱范围内呈现低背景
- 硬质封片剂
- 可以选择带含或不含DAPI 配方
- 即用型实验室存放优化配方
- 可根据您的需要选择折射率：ProLong Glass 试剂的折射率为1.52，ProLong Diamond和ProLong Gold试剂的折射为1.47
 | ProLong抗淬灭封片剂可以抑制发生光漂白，保护荧光标记靶标分子的信号，以便进行样本长期储存和分析。该试剂会在24小时内固化，形成折射率为1.46的半硬质凝胶。而固化封片后的样品，在适当储存条件下可以保存数月。ProLong抗淬灭试剂具有以下几大优点：
|
用于固定细胞成像实验的ProLong抗淬灭试剂的优势亮点
ProLong Gold 抗淬灭封片剂的特点
ProLong Gold 抗淬灭封片剂因能够保护整个可见光谱内的信号，使初始信号几乎无淬灭，备受广大实验员认可，如今已被广泛用于Invitrogen高性能荧光染料和染色剂。ProLong Gold抗淬灭试剂能够在室温环境下保持稳定—即可存放在实验台上，方便在下一次成像实验中随时取用。
ProLong Diamond 抗淬灭封片剂的特点
ProLong Diamond封片剂具有ProLong Gold 试剂对Alexa Fluor 染料抗淬灭性能，此外还可为传统染料和荧光蛋白提供保护。ProLong Diamond是一款性能出色的抗淬灭封片剂，不仅具有低背景，而且能够在可见和近红外光谱内提供抗淬灭保护。存放时，为保持最佳性能，请注意冷藏储存。
ProLong Glass 抗淬灭封片剂的特点
ProLong Glass封片剂具有ProLong Diamond封片剂抗淬灭性能，其清晰度在ProLong系列产品中亦是最佳—具有更高的分辨率和更大的聚焦深度，使图像更明亮、更清晰。ProLong Glass是一款性能杰出的抗淬灭试剂，具有出色的清晰度、与玻璃相同的折射率1.52、最佳焦深和低背景，并且能够在可见和近红外光谱内提供抗淬灭保护。存放时，为保持最佳性能，请注意冷藏储存。
此组60秒延时拍摄图像结果表明，ProLong系列抗淬灭封片剂可显著增强荧光信号的耐光漂白性。使用荧光素标记的鬼笔环肽标记固定的HeLa细胞，并分别使用ProLong Glass试剂、ProLong Diamond试剂、ProLong Gold试剂、或50% PBS/甘油封片处理。
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FITC光漂白曲线，由宽场或共聚焦显微镜照射后样品拍照获得。用mouse anti-tubulin一抗标记HeLa细胞，使用荧光素（FITC）标记的山羊抗小鼠二抗检测，并使用PBS + 50%甘油或多种市售抗淬灭封片剂处理。(A)采用100瓦特汞弧灯照射样品2分钟，用20x 物镜观察，并使用12bit单色相机采集图像，绘制光漂白曲线。图为根据三个视野的平均荧光强度随时间变化的曲线图。(B)使用共聚焦显微镜的20x油镜观察，扫描目标区域50次，每个像素停留时间为1.6 μs，绘制光漂白曲线。激发光源强度设置，参照使ProLong Diamond在最后一次扫描结束时保留50%的初始信号强度标准。检测器增益对所有封片剂保持不变。图为根据各封片样品的15个目标区域的平均荧光强度随扫描次数变化的曲线图。
在全光谱范围内增强荧光信号保护作用
ProLong Glass和ProLong Diamond试剂都是出色的抗淬灭封片剂，不仅具有低背景，在可见和近红外光谱内都能提供抗淬灭保护，同时还可使荧光信号产生更少的初始淬灭。此外，也可为FITC等传统染料和GFP等荧光蛋白提供抗淬灭保护作用。与市售硬质抗淬灭封片剂进行标准化实验对比后，发现ProLong系列抗淬灭封片剂在保护荧光信号和在光谱范围内防止光漂白效应方面的性能均完胜其他同类产品。
| 荧光染料 |
Ex/Em (nm)
| 耐光漂白性* | |||
|---|---|---|---|---|---|
| ProLong Glass | ProLong Diamond | ProLong Gold | VECTASHIELD | ||
| DAPI |
345/455
| +++ | +++ | ++ | ++ |
| Hoechst | 350/461 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| GFP |
488/510
| ++ |
++
|
不推荐
|
+
|
| BODIPY FL |
505/513
| 未检测 |
+++
|
+
|
+
|
| 荧光素 |
494/518
| +++ |
+++
|
+
|
++
|
| Alexa Fluor 488 |
495/519
| +++ |
++
|
++
|
++
|
| Alexa Fluor Plus 488 | 495/519 | +++ | ++ | + | + |
| Alexa Fluor 555 |
555/565
| +++ |
+++
|
+++
|
+++
|
| Alexa Fluor Plus 555 | 555/565 | +++ | +++ | ++ | ++ |
| Cy3 |
550/570
| ++ |
++
|
++
|
++
|
| Alexa Fluor 546 |
556/575
| ++ | ++ |
+++
|
++
|
| 四甲基罗丹明 |
555/580
| ++ |
+++
|
+
|
+
|
| TagRFP | 555/584 | 未检测 | + | 不推荐 | + |
| Alexa Fluor 568 |
578/603
| +++ |
+++
|
+
|
+
|
| mCherry | 575/610 | +++ | +++ | +++ | +++ |
| Texas Red |
595/615
| +++ |
+++
|
+++
|
++
|
| Alexa Fluor 594 |
590/617
| +++ |
+++
|
+++
|
++
|
| TO-PRO-3 |
642/661
| +++ |
+++
|
+
|
+
|
| Alexa Fluor 647 |
652/668
| +++ |
+++
|
+++
|
不推荐
|
| Alexa Fluor Plus 647 | 652/668 | +++ | +++ | +++ | 不推荐 |
| Cy5 |
650/670
| +++ |
+++
|
+++
|
++
|
| 注释：+++ = 80%以上；++ = 65—80%, + = 50—65%, 不推荐 = 50%以下。百分比代表剩余可检测到的信号强度。 * 耐光漂白性通过使用Zeiss™ LSM 710共聚焦显微镜检测剩余信号强度，对光漂白抗性进行定量。首先使用标准免疫细胞化学（ICC）实验方案对HeLa或U2OS细胞进行染色和封片。然后对3个视野内的5个区域扫描15次—每个像素的停留时间为1.58 μs。并针对荧光基团对激发波长和强度进行优化。最后在落射荧光显微镜上用100瓦特汞弧灯照射，光/光子暴露时间将为60—90秒。 VECTASHIELD为Vector Laboratories, Inc. , Burlingame, CA商标。Cy为GE Healthcare UK, Ltd.商标。 | |||||
ProLong Glass 抗淬灭封片剂具有类似于盖玻片、香柏油和油镜光学器件的折射率（RI）—约1.52的特点与优势，为ProLong试剂产品再添新彩。其出色的光学清晰度意味着，与折射率为1.47的封片剂相比，ProLong Glass 试剂的纵向分辨率提高了75%，可成像聚焦深度提高了3—4倍，可为单层细胞、组织切片或厚度达150 μm的3D细胞培养物等提供清晰的成像。
ProLong Glass抗淬灭封片剂的成像厚度提高40%，使组织切片中厚70 μm的细胞核也能清晰成像。首先处理FFPE猪脑切片并使用DAPI细胞核染色剂染色过夜。然后使用不同市售硬质抗淬灭剂，根据各封片剂的推荐实验方案处理染色样品。并使用Zeiss™ LSM 710共聚焦显微镜的Plan-Apochromat 63x/1.4 NA油镜对组织切片进行观察成像—x和y维度的取样间隔距离为83 nm，z维度的取样间隔距离为100nm，像素尺寸为0.07 μm。最后使用Zeiss™ Zen软件生成Z演算。
ProLong Glass 抗淬灭封片剂固化至最终RI约等于1.52。取300 µL各种封片剂涂布并覆盖待测棱镜表面，并使用Thermo Scientific ABBE-3L 折射计检测不同ProLong抗淬灭封片剂的折射率。
RI为1.52的ProLong Glass比RI为1.47的封片剂具有更高的纵向分辨率。两种封片剂中170 μm微球的横向和纵向分辨率，绘制为在各个焦深处获得的图像点扩散函数（PSF）。（误差线：标准偏差 n ≥ 3）。
使用ProLong Glass 抗淬灭封片剂封固的A549 球状体的纵向和横向共聚焦图像。